生堡捡墅医堂苤壶婴!生堡旦筮!!鲞筮堡翅堡垒垫』!生丛盟：叁世!!塑!：!丛!!：奠!：璺．临床实验诊断研究．耐万古霉素肠球菌二株的耐药基因及传播机制研究王杰瞿婷婷俞云松周建英陈亚岗肠球菌是重要的条件致病菌之一，不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。近年来抗菌药物的广泛应用，使肠球菌对多种抗菌药物产生耐药，并成为导致医院感染的莺要致病菌。由于肠球菌对抗生素的耐药性增加，特别是近年出现的万古霉素耐药肠球菌(VRE)给临床治疗造成困难。本研究分析了杭州市分离到的两株VRE荫株的克隆相关性、耐药性及耐药传播机制，为VRE感染的防治提供基础。一、材料与方法(一)菌株来源2种万古霉素耐药的肠球菌：ZY01于2006年4月分离自浙江大学医学院附属第一医院，HS03于2006年6月分离自杭州市第三人民医院。2株VRE菌株均来源于住院患者的血液标本，均经生物梅里埃公司API鉴定板重新鉴定。质控菌株为粪肠球菌ATCC29212。(二)VRE的筛选根据2006年临床和实验室标准协会(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute，CISl，旧称NCCLS)操作规则，采用琼脂筛选法，用含万古霉素6Ixg／ml的BHI琼脂平板，接种细菌106CFU／点于平板上，35℃培养24h，点种处只要有一个菌落生长则为VRE。(三)药敏试验采用Etest法测定万古霉素、替考拉宁、庆大霉素、链霉素对VRE的最低抑菌浓度(MIC)。并采用纸片扩散法测定VRE对氨苄西林、四环素、氯霉素、红霉素、呋喃妥因、磷霉素、环丙沙星、利福平、利奈唑胺的耐药性。药敏判断标准参照CLSl2006E1|。(四)VRE菌株的同源性分析采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)‘2】1．染色体DNA的制备：菌体包埋细菌接种于2ml心脑浸出液(BHI)培养基中，35％振荡过夜；7000×g离心2min，沉淀用1mlTEN液(0．2mol／LTrisCl，0．3mol／LNaCI，0．26mol／L乙二胺四乙酸钠)混匀；再次离心，沉淀用Ec液(0．01mol／LTrisCl，0．5mo]／LNaCl，0．121mol／L乙二胺四乙酸钠，非离子型去污剂Brij58．5g，0．2％去氧胆酸盐，0．5％N-十二烷基肌氨酸钠)混匀，调节细菌浊度大于4麦作者单位：310003杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸科(王杰、周建英)，传染病诊治国家重点实验室(瞿婷婷、俞云松、陈亚岗)通讯作者：周建英，电子信箱：．1rzjy@163．COnl氏点；加入已融化的等体积的2％的低熔点胶，混匀后迅速倒入模具，4℃冰箱中凝固约20rain。凝固后胶块放到含200山溶菌酶(用EC配制为25mg／m1)的1mlEC缓冲...
