浙江省第六届大学生生命科学学科竞赛实验记录序号：53实验时间：9月22日15:00－20:00请勿透露学校、教师和个人信息大鼠心肌组织ET-1的表达测定预实验【实验结果】大鼠心肌组织ET-1表达测定结果如图1所示：00.20.40.60.811.21.41.6正常组模型组OJP1-100组OJP1-300组普萘洛尔组ET-1mRNAfold(2-△△Ct)图1OJP1对大鼠心肌组织ET-1表达的影响（SX，n=3）【讨论】由结果可见，OJP1-100组和普萘洛尔组的表达极低，考虑可能由于：引物的储存浓度是100µmol/L，而工作浓度为10µmol/L，我们使用前忘记稀释，不得不重新配体系，但引物稀释时混合不均匀，导致荧光定量PCR反应无法完全进行。正常组大鼠ET-1表达明显高于其他给药组，尤其高于模型组，可能在加样时将模型组样品和正常组样品混淆，也可能是加样时由于操作原因使试剂遭到污染，以致反应体系出现过高的情况。而且同一组的3个复孔数据差异非常大，考虑大家做PCR次数不多，对于微量试剂的吸取和混匀不熟练，可能是本次实验结果不理想的原因。接下去正式实验需要注意改进的有：1）体系配制要在冰上进行；2）加样时要注意，避免体系受到污染，导致特征曲线出现多重峰，得到不准确的结果；3）试剂准备和样品处理时应使用超净工作台，以防止对环境的污染；4）配制反应体系时，应注意移液器的使用方法，所有的液体都要缓慢加至管底，不要加至管壁，所有液体的混匀要用振荡器进行，不能用移液器吹打，反应体系配制完毕后低速离心数秒，避免产生气泡。
