浙江省第六届大学生生命科学学科竞赛实验记录序号：09实验时间：7月19日8:30－17:00请勿透露学校、教师和个人信息人脐静脉内皮细胞传代培养【实验结果】倒置显微镜下观察到细胞长满瓶壁，呈铺路石状镶嵌排列，细胞密集，有些许死细胞和悬浮细胞（图1），因此判断可以传代。传代后镜下观察，细胞呈圆润状，一些细胞连接成团，细胞数量适当（图2）。图1细胞传代前的HUVEC（x100）图2细胞刚传代后的HUVEC(x100)【讨论】镜下发现传代出来细胞有些连接成团，分析原因如下：可能由于传代前细胞长太满，出现成层生长，胰酶消化时间短，吹打不均匀等。因此，细胞千万不能长太满，80－90％就好（细胞刚刚基本成单层细胞，没有出现成层生长），即可开始传代。消化时，镜下看出现细胞回缩，倒掉消化液（放置一会儿，用残留的胰酶消化）待细胞变圆，吹打均匀。消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶，这样细胞特别容易成屑样脱落。【注意事项】1.适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。2.传代过程中需要使用滴管将培养瓶底部已消化的细胞吹打成细胞悬液，操作过程注意吹打力度，避免产生气泡。
