浙江省第六届大学生生命科学学科竞赛实验记录序号：30实验时间：8月09日9:30－11:30请勿透露学校、教师和个人信息HUVEC细胞冻存【讨论】细胞冻存基本原则是慢冻，本实验采用4℃冰箱约40min，-20℃冰箱约30min，-80℃超低温冰箱中放置过夜，应注意这个温度时间梯度。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。利用冻存技术将细胞保存起来，在需要的时候再复苏细胞用于实验。适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。冻存细胞我们选择在培养瓶中致密度80%~90%的生长状态良好的细胞。在冻存细胞过中，-15℃对细胞损伤严重，故我们采用-20℃冰箱中缓慢降温30min左右，以达到实验效果。【注意事项】1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞，在冻存前一天最好换一次培养液。2.使用DMSO前，不需要进行高压灭菌，它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破坏它的分子结构，以致降低冷冻保护效果。在常温下，DMSO对人体有害，故在配制时最好戴上手套操作。3.DMSO在4℃以上对细胞的毒性很大，操作过程注意冰浴。4.不宜将冻存细胞放置在0℃～-60℃这一温度范围内过久，低温损伤主要发生在这一温度区内，是“危险温区”。5.注意定期检查液氮罐内液氮量，及时添加。
