酸谈实验室补充材料05WB实验流程、注意事项、数据处理及写作等猫大后宫团荣誉出品酸谈实验室补充材料05www.helixlife.cn1目录Westernblot实验步骤与注意事项by妍儿&逛吃逛吃逛吃...........2WBprotocol&注意事项by七七..............................................11WB测组织和细胞的蛋白表达量by威少....................................23蛋白提取相关知识介绍byGina.................................................40膜蛋白提取介绍by旺...............................................................48BCA蛋白浓度检测（碧云天P0012为例）by常春艳...............51半干转与湿转对比by刘霈........................................................55WB实验细节by雷厉................................................................60问题条带的心得体会by瑶........................................................62WesternBlot常见问题及对策by赵河河..................................66WBtroubleshootingbyhello&慧美..........................................68做好WesternBlotting，你需要知道的那些事儿by阿拉雷........71WB数据处理与图表制作by阿波没有罗....................................78WB写作by巧巧、梁鸾&Ping...................................................90酸谈实验室补充材料05www.helixlife.cn2Westernblot实验步骤与注意事项by妍儿&逛吃逛吃逛吃一、实验目的对分别用RIPA或LaemmliSampleBuffer液提取的蛋白进行Westernblot，以检测蛋白分子的表达情况。二、实验原理首先根据蛋白分子量不同分离蛋白，即进行SDS-PAGE电泳，然后把电泳分离开的蛋白从凝胶转移到固相支持体上，并以针对目的分子特定氨基酸序列的特异性试剂(抗体)检测之。此技术可以对蛋白进行鉴定和半定量。三、实验材料1.试剂：分离胶、浓缩胶、SDSloadingbuffer（还原型，5×）、电泳缓冲液、电转缓冲液、封闭液、TBST/PBST洗膜液、抗体、预染的ProteinMarker、ECL化学发光试剂等。2.仪器：-20℃低温冰箱、BIO-RAD垂直板电泳转移装置（或者NOVEXiBlot蛋白快速电泳/干转印系统）、多用脱色摇床。3.杂品与耗材：各种规格的吸头、离心管和加样器；各种规格的烧杯、量筒和平皿等玻璃器材；PVDF膜（0.22µm/0.45µm，根据分子量大小而定），滤纸，手套，搪瓷盘（>20×20cm），滚轮，计时器，吸水纸等。4.试剂配制：5.TBST：TBS（...
