第五章离心技术第五章离心技术免疫研究室易浪免疫研究室易浪离心技术:是利用旋转运动产生的离心力,根据物质的沉降系数或浮力密度的差别进行物质的分析、分离、浓缩和提纯的一种技术。第一节离心技术的基本原理分离、纯化样品;对已纯化的样品进行结构和性质的分析。悬浮颗粒在液体介质的扩散运动一、离心的一般原理颗粒越小,则沉降越慢,扩散现象越严重。颗粒运动的方向和速度颗粒的密度、形状、大小液体介质的密度、粘度和重力场的强度1、离心力和相对离心力离心力(centrifugalforce,F)指悬浮颗粒在离心过程中所受的离开旋转中心轴的作用力,由下式计算:相对离心力(relativecentrifugalforce,RCF):在离心场中颗粒所受的离心力相当于它受到的地球重力的倍数(×g)。F=m2rω:旋转角速度(弧度/秒)r:旋转体离旋转轴的距离(cm)m:颗粒质量2、沉降系数(sedimentationcoefficient,S)沉降系数是指在单位离心力作用下,待分离颗粒的沉降速度。)(1822drvSS的单位为秒,为了纪念离心技术早期的奠基人Svedberg,而把10-13秒称为一个Svedberg单位(S),即lS=10-13秒。在生物学各种论文中常见的某物质沉降系数为多少个S,即指此单位。颗粒的半径颗粒的密度介质的密度溶液的粘度S的数值受颗粒的相对分子质量和形状等特性的影响。预计沉降时间;测定物质相对分子质量。3、沉降速度(sedimentationvelocity,v)沉降速度是指在离心力作用下,单位时间内颗粒沉降的距离。rddtdxv22)(18颗粒的半径颗粒的密度介质的密度溶液的粘度4、沉降时间(t)和相对分子质量(Mr)沉降时间决定于颗粒的沉降速度和沉降距离。minmax22RRln)(dt]lnln[S12minmaxRRt用于差速离心实验离心机的分类按转速分为低速、高速和超速三种;按用途分为实验型和工业型两种,前者分为分析型和制备型两种;按使用温度分为常温和冷冻两种;按驱动方式分为手摇式、油涡轮式、气动式、电动式和磁悬式等。第二节离心设备preparativeultracentrifuge转头驱动装置速度控制系统冷却装置真空装置光学检测系统离心机的构造a水平转头b角式转头c垂直转头角度在14-40℃之间离心转头学生实验中常用的是普通离心机(转速一般不高于4000rpm),用于分离血清和沉淀细胞、大的沉淀物等。玻璃离心管用于速度较低的离心,具有管壁光滑、透明和易清洁等优点,但易破碎,故不能用于高速离心。塑料离心管超速离心时,离...