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第五章离心技术第五章离心技术免疫研究室易浪免疫研究室易浪离心技术:是利用旋转运动产生的离心力,根据物质的沉降系数或浮力密度的差别进行物质的分析、分离、浓缩和提纯的一种技术。第一节离心技术的基本原理分离、纯化样品;对已纯化的样品进行结构和性质的分析。悬浮颗粒在液体介质的扩散运动一、离心的一般原理颗粒越小,则沉降越慢,扩散现象越严重。颗粒运动的方向和速度颗粒的密度、形状、大小液体介质的密度、粘度和重力场的强度1、离心力和相对离心力离心力(centrifugalforce,F)指悬浮颗粒在离心过程中所受的离开旋转中心轴的作用力,由下式计算:相对离心力(relativecentrifugalforce,RCF):在离心场中颗粒所受的离心力相当于它受到的地球重力的倍数(×g)。F=m2rω:旋转角速度(弧度/秒)r:旋转体离旋转轴的距离(cm)m:颗粒质量2、沉降系数(sedimentationcoefficient,S)沉降系数是指在单位离心力作用下,待分离颗粒的沉降速度。)(1822drvSS的单位为秒,为了纪念离心技术早期的奠基人Svedberg,而把10-13秒称为一个Svedberg单位(S),即lS=10-13秒。在生物学各种论文中常见的某物质沉降系数为多少个S,即指此单位。颗粒的半径颗粒的密度介质的密度溶液的粘度S的数值受颗粒的相对分子质量和形状等特性的影响。预计沉降时间;测定物质相对分子质量。3、沉降速度(sedimentationvelocity,v)沉降速度是指在离心力作用下,单位时间内颗粒沉降的距离。rddtdxv22)(18颗粒的半径颗粒的密度介质的密度溶液的粘度4、沉降时间(t)和相对分子质量(Mr)沉降时间决定于颗粒的沉降速度和沉降距离。minmax22RRln)(dt]lnln[S12minmaxRRt用于差速离心实验离心机的分类按转速分为低速、高速和超速三种;按用途分为实验型和工业型两种,前者分为分析型和制备型两种;按使用温度分为常温和冷冻两种;按驱动方式分为手摇式、油涡轮式、气动式、电动式和磁悬式等。第二节离心设备preparativeultracentrifuge转头驱动装置速度控制系统冷却装置真空装置光学检测系统离心机的构造a水平转头b角式转头c垂直转头角度在14-40℃之间离心转头学生实验中常用的是普通离心机(转速一般不高于4000rpm),用于分离血清和沉淀细胞、大的沉淀物等。玻璃离心管用于速度较低的离心,具有管壁光滑、透明和易清洁等优点,但易破碎,故不能用于高速离心。塑料离心管超速离心时,离...

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