免疫研究室易浪langyi@gzucm.edu.cn核酸的分离与纯化核酸的分离与纯化核酸的分离与纯化•核酸是遗传信息的载体，是重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此，核酸的基本操作是分子生物学研究中最基本、最重要的技术之一。•核酸的基本操作包括核酸的分离和纯化、检测和保存、凝胶电泳、分子杂交等。•主要介绍核酸的分离和纯化相关内容核酸的分离与纯化主要内容主要内容DNA的提取与纯化RNA的提取与纯化核酸的分离与纯化理化特性核酸都是极性化合物，微溶于水，而不溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂。核酸溶于10%左右的氯化钠溶液，但在50%左右的酒精溶液中溶解度很小。核酸的提取时常利用这些性质。核酸的分离与纯化一般原则保持核酸结构的完整性，即保持核酸的天然状态，防止核酸酶的降解。防止其他物质的污染：蛋白酶、金属离子、有机溶剂、多糖等。防止化学因素（酸、碱或有机溶剂）及物理因素（机械剪切或高温）引起核酸变性和破坏。核酸的分离与纯化注意事项1．尽量简化操作步骤，缩短提取过程，减少对核酸的破坏。2．避免过酸、过碱等化学因素对核酸的降解。（pH4-10）3．减少物理因素对核酸的降解。主要是避免机械剪切力和高温。常规操作温度为0-4℃℃。4．防止核酸的生物降解。所用器械和一些试剂需高压灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。操作温度为0~4℃。DNA酶需要金属离子Mg2+、Ca2+的激活，因此使用金属离子螯合剂，如EDTA或柠檬酸盐等；阴离子表面活性剂SDS。RNA酶分布广泛，极易污染样品，而且耐高温、耐酸碱、不易失活，生物降解是RNA提取过程中的主要危害因素。0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）浸泡，器械180℃干烤8h。核酸的分离与纯化主要步骤1．破碎细胞。2．去除与核酸结合的蛋白质，多糖以及脂类等生物大分子。3．去除其它不需要的核酸分子。4．沉淀核酸，去除盐类、有机溶剂等杂质。5．核酸纯化。核酸的分离与纯化基本方法溶解法层析法电泳法超速离心法沉淀浓缩法核酸的分离与纯化溶解法组织或细胞碎片混合液上层水相液体上层水相液体下层水相液体核酸样品破碎组织或细胞加入酚/氯仿混合高速离心加入氯仿混合高速离心加入无水乙醚静置分层冷70%乙醇缓慢加入核酸的分离与纯化酚通常是透明无色的结晶，如果酚结晶呈现粉红色或黄色，表明其中含有酚的氧化产物，例如醌、二酸等。变色的酚不能用于核酸抽提实验，因为氧化物可破坏核酸的磷酸二酯键。酚腐蚀性很强，并可引起严重的灼伤，操作时应戴手套。注...
