归脾汤防治抑郁样行为的作用及其基于网络药理学的机制研究.pdf

中国药理学与毒理学杂志2023年9月第37卷增刊1Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 37，Suppl 1,Sep 2023摘要：目的 通过动物实验阐明酸枣仁汤对小鼠焦虑样行为的改善作用，网络药理学预测酸枣仁汤的靶点，采用分子对接和化合物活性评价，探讨酸枣仁汤抗焦虑的潜在作用物质基础。方法 通过高架十字迷宫、明暗箱和旷场实验观察酸枣仁汤对小鼠焦虑样行为的改善作用。采用MetaCore数据库与分子对接技术分别对相关生物分子进行通路富集分析与靶点-化合物结合能预测，钙通量法检测化合物对靶点的激活作用，通过高架十字迷宫、旷场实验评价所预测化合物的抗焦虑作用。结果酸枣仁汤（43.4 gkg-1d-1）可能通过GABA能突触和 5-HT 能突触等发挥抗焦虑作用，改善戊四唑（30 mgkg-1）诱导的小鼠焦虑样行为。分子对接发现灰绿曲霉酰胺、异芒果苷、大黄酚与大麻素受体1（CNR1）的亲和力较好。钙流实验结果表明大黄酚、大黄素和山奈酚对CNR1有激活作用，其EC50分别为138.3，54.37和52.28 molL-1，其中山奈酚和大黄酚对正常小鼠表现出较好的抗焦虑作用。结论 酸枣仁汤可能通过GABA能和大麻素受体信号通路调控焦虑行为，其中山奈酚和大黄酚可能是酸枣仁汤治疗焦虑的物质基础。关键词：酸枣仁汤；焦虑；大麻素受体1基金项目：国家自然科学基金（82205078）；山东省自然科学基金（ZR2021QH157）作者简介：鲍晓虹，E-mail：通讯作者：程肖蕊，E-mail：W2-3-2血清、血浆和血小板 5-HT作为抑郁症诊断和疗效评价的分子标记物可行性实验研究苏钻君1，2，李灿烨1，2，曹金铭1，2，陈智聪1，2，徐 峰1（1.上海交通大学第六人民医院南院药剂科，上海201400；2.南 方 医 科 大 学 药 学 院，广 东 广 州510515）摘要：目的 探索血清、血浆和血小板中的5-HT水平作为抑郁症诊断和疗效评价的分子标记物可行性。方法 C57BL/6小鼠和SD大鼠分为对照组（NC，n=10），慢性不可预见温和应激组（CUMS，n=20），后者给予慢性应激 28 d 后分为 CUMS 组（CUMS，n=10）和CUMS+氟西汀组（CUMS+FLX，n=10，10 mgkg-1d-1），各组连续ig给药28 d，收集大脑皮层、海马体和结肠及给药前后血液。采用LC-MS/MS检测血清、血浆和血小板以及组织5-HT的水平。蛋白免疫印迹方法检测组织和血小板相关蛋白（SERT、TPH1、TPH2以及 5-HT1a）的表达量。结果 小鼠和大鼠慢性应激模型造模成功。造模结束时，与NC组相比，CUMS组血清5-HT水平均显著升高（小鼠P0.05，大鼠P0.01），血浆5-HT水平均降低（小鼠P0.05），小鼠血小板5-HT水平有下降趋势，大鼠则无明显差异。氟西汀给药后，与CUMS组相比，CUMS+FXL组抑郁样行为均改善，体重增加，血清、血浆和血小板的5-HT水平均显著性下降。组织学结果方面，相较于 NC 组，CUMS组的大脑皮层、海马体和结肠中5-HT均下降，海马体SERT蛋白水平增加，大脑皮层和海马体中TPH2和5-HT1a蛋白水平降低，结肠中TPH1蛋白水平显著降低（P0.01）。氟西汀给药后，相较于CUMS组，CUMS+FLX组大脑皮层、海马体和结肠中5-HT出现升高的趋势，海马体SERT蛋白水平降低，大脑皮层和海马体中TPH2和5-HT1a蛋白水平增加，结肠 TPH1 蛋白水平则显著性增加。结论 综合研判二种动物抑郁样行为，其中枢系统5-HT 及相关蛋白分子的改变趋势相近。但外周5-HT水平的改变存在变异，外周血浆中5-HT水平（均降低）可能作为抑郁症诊断的分子标记物；尽管外周5-HT在给予SSRI治疗均呈下降趋势，但能否用于疗效评估有待进一步大样本的深入研究。关键词：血清素；抑郁症；分子标记物；慢性不可预测温和应激；氟西汀基金资助：上海市科学委员会（19411971700）通讯作者：徐 峰，E-mail：W2-3-3归脾汤防治抑郁样行为的作用及其基于网络药理学的机制研究叶田园，陈丽媛，程肖蕊（山东中医药大学中医药创新研究院，山东 济南250355）摘要：目的 基于腹腔注射脂多糖诱导的抑郁小鼠模型，评价归脾汤对抑郁症的防治作用，基于通路富集分析和分子对接探讨归脾汤防治抑郁症的潜在作用机制。方法 通过腹腔注射脂多糖（LPS）制备抑郁小鼠模型，悬尾实验、旷场实验、强迫游泳实验、毛色评分、糖水泼溅实验等行为学实验检测归脾汤对小鼠抑郁样行为的改善作用，并利用网络药理学方法预测归脾汤防治抑郁症的机制，酶学活性实验验证分子对接所得潜在活性化合物-靶点对的相互作用。结果 归脾汤对LPS诱导的小 24中国药理学与毒理学杂志2023年9月第37卷增刊1Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 37，Suppl 1，Sep 2023鼠抑郁样行为具有改善作用，其机制可能在于调节神经可塑性相关通路、血管形态发生、视黄醇代谢通路、CREM 通路、雌激素和雄激素信号通路等。三叶豆苷、吉九里香碱、11H-苯并 C 咔唑靶向PDE4发挥作用可能是归脾汤防治抑郁症的部分活性成分。结论 归脾汤具有防治抑郁症的作用，其机制涉及调节神经可塑性、血管形态发生、视黄醇代谢通路、CREM通路、雌激素和雄激素信号通路等，其所含成分三叶豆苷、吉九里香碱、11H-苯并C 咔唑抑制PDE4的活性。关键词：归脾汤；抑郁症；磷酸二酯酶4作者简介：叶田园，E-mail：通讯作者：程肖蕊，E-mail：W2-4 心病W2-4-1Exploring the mechanism of icariin in regulating cardiac microvascular endothelial cellsbased on network pharmacology,moleculardocking and in vitro experimentsCAO Ce1,2,LI Li2,WANG Ziyan2,LI Haoran2,LIU Jianxun1,2(1.Institute of Chinese Medicine Sciences,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China;2.NationalClinicalResearchCenter of Traditional Chinese Medicine for Cardiovascular Diseases,China Academy of ChineseMedicalSciences,BeijingKeyLaboratoryofChinese Materia Pharmacology,Institute of BasicMedicalSciencesofXiyuanHospital,Beijing100091,China)Abstract:OBJECTIVETo investigate theregulatory effects of icariin(ICA)on cardiac microvascular endothelial cells(CMEC)after oxygen-glucose deprivation reperfusion(OGD/R)injury.METHODS CMEC were subjected to OGD/Rtreatment to construct a myocardial ischemia-reperfusion model,and were divided into normal,model,low(10 molL-1),medium(20 molL-1)and high(40 molL-1)ICA group,and high ICA+inhibitor group(40 molL-1+20 nmolL-1).CCK-8 assay was used to assess the protective abilityof ICA against CMEC,and cell migration assayand tube-formation assay were used to detectthe migration and generation ability of CMEC.The TCMSP database,Swiss-Target databaseand literature mining methods were used to collect ICA-related targets,the GeneCards database was used to collect target genes related tomyocardial ischemia/reperfusion,and Cytoscape3.8.0 software was used to construct a drug-target-disease network.The potential targets wereimported into STRING 11.5 database to obtainthe PPI network.GO and KEGG enrichmentanalyses were performed on the potential targetsusing the DAVID database.Molecular dockingwas performed using AutoDock-vina 1.1.2 software.Western blot detected the expression ofrelated proteins.RESULTSAfter CMEC wassubjected to OGD/R treatment,ICA had a protective effect at 10-160 molL-1;the results of thecell migration assay showed that each group ofICA could promote the migratory effect of CMEC(P0.01,P0.01);and the results of tube-formation assay showed that each group of ICAcould significantly promote the generation ofbranches(P0.01)and the capillary length extension(P0.05).Network pharmacology collecteda total of 23 ICA action targets,1500 disease targets and 12 key targets.GO function enrichmentanalysis found 85 results.KEGG pathway enrichment analysis found 53 results,involving AGE-RAGE signaling pathway,sphingolipid signalingpathway and VEGF signaling pathway.Molecular docking results showed that ICA had betterbinding with core targets PRKCB,PRKCA andPTGS2.Western blot results showed that ICAcould regulate the expression of PRKCB,PRKCAand PTGS2 proteins.The results of cell migration assay,tube-formation assay and proteinexpression were reversed after addition of PKCinhibitor.CONCLUSIONThe potential mechanism of action of ICA against myocardial ischemia-reperfusion injury may be related to the regulation of processes such as CMEC migrationand angiogenesis,and it functions through thekey target gene PKC.Key words:icariin;myocardial ischemia-reperfu 25