临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第六章沉淀反应第一节沉淀反应的特点沉淀反应是可溶性抗原与相应抗体在特定条件下特异性结合所出现的沉淀现象。沉淀反应中的抗原多为蛋白质、多糖、血清、毒素等可溶性物质。沉淀反应分两个阶段:第一阶段为抗原抗体发生特异性结合,几秒到几十秒即可完成,出现可溶性小的复合物,肉眼不可见。第二阶段为形成可见的免疫复合物,约需几十分钟到数小时才能完成,如沉淀线、沉淀环。第二节液体内沉淀试验一、絮状沉淀试验抗原抗体溶液在电解质的存在下结合,形成絮状沉淀物,这种絮状沉淀受抗原和抗体比例的直接影响,因此常用来作为测定抗原抗体反应最适比例的方法。(一)抗原稀释法(二)抗体稀释法(三)方阵滴定法抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗血清反应。抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应。方阵滴定法即棋盘滴定法二、免疫浊度测定免疫浊度测定本质上属于液体内沉淀反应。将现代光学测量仪器与自动化检测系统相结合应用于沉淀反应。可进行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测。(一)免疫比浊测定的影响因素1、抗原抗体的比例抗原抗体的比例是浊度形成的关键因素,当抗原和抗体的比例适当时,二者全部结合,既无过剩的抗原,也无过剩的抗体。当反应液中抗体过量时,IC的形成随着抗原递增而增加,至抗原、抗体最适比例处达最高峰,这就是经典的海德堡曲线理论。当抗原过量时,形成的IC(免疫复合物)分子小,而且会发生再解离,使浊度反而下降,光散射亦减少,这就是高剂量钩状效应。2、抗体的质量免疫比浊测定法要求抗体的特异性强、效价高、亲和力强,并使用R型抗体。3、抗原抗体反应的溶液抗原抗体反应液的最适pH为6.5~8.5。一般常使用磷酸盐缓冲液作为免疫比浊法的反应液。4、增浊剂某些非离子型亲水剂对促进IC的形成有显著的增强作用,如聚乙二醇(PEG)、吐温-20。其作用是消除蛋白质(抗原或抗体)分子周围的电子云和水化层,促进抗原、抗体分子靠近,结合形成大第1页临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》分子复合物。(二)抗体稀释法1、透射免疫比浊法2、散射免疫比浊法3、免疫胶乳比浊法第三节凝胶内沉淀试验凝胶内沉淀试验是利用可溶性抗原和相应抗体在凝胶内扩散,形成浓度梯度,在抗原与抗体浓度比例恰当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。凝胶支持物的种类有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶等。一、单向扩散试验单向扩散试验是在琼脂内混入...