临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术第一节免疫细胞的分离第二节淋巴细胞标志及亚群分类第三节其他的免疫细胞第四节免疫细胞表面标志的检测及应用第一节免疫细胞的分离一、外周血单个核细胞的分离外周血中单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的比重与红细胞、多核白细胞及血小板不同，介于1.075～1.090之间，红细胞及粒细胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之间，因而可利用一种比重介于1.075～1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。分离介质是分离各类细胞的关键，对分离介质的基本要求是：①对细胞无毒；②基本等渗；③不溶于血浆及分离物质；④有特定的比重。将2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液与1份34%泛影葡胺生理盐水溶液混合，其比重为1.077±0.002，可作为常规的淋巴细胞分离液，即Ficoll分离液。主要用于分离外周血中单个核细胞，是一种单次密度梯度离心分离法，其分布由上到下依次为：稀释的血浆层、单个核细胞层、粒细胞层和红细胞层。二、淋巴细胞的分离纯淋巴细胞群的采集是利用单核细胞在37℃和Ca2＋存在时，能主动黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性，从单个核细胞悬液中除去单核细胞，从而获得纯淋巴细胞群。1.黏附贴壁法2.吸附柱过滤法3.磁铁吸引法4.Percoll分离液法三、T细胞和B细胞的分离1.E花环沉降法2.尼龙毛柱分离法四、T细胞亚群的分离1.亲和板结合分离法2.磁性微球分离法3.荧光激活细胞分离仪分离法五、不同细胞分离方法的综合评价传统的细胞分离技术主要采用离心法，利用密度梯度原理进行分离，时间长、效果差。近期发展起来的细胞分离技术大多是基于利用细胞表面标志（抗原或受体）进行细胞分离，较早出现的技术以细胞亲和层析为代表。随后出现细胞固相包被技术，细胞淘洗技术，同时还有流式细胞仪分离技术，磁性微球分离法。第1页临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》六、分离细胞的保存和活力测定1.短期保存技术将分离的细胞用适量含10%～20%灭活小牛血清的Hanks、Tc-199、RPMI1640或其他培养液稀释重悬。短期保存可置于4℃保存。2.长期保存技术液氮深低温（-196℃）环境保存细胞，加入二甲亚砜作为保护剂。活力测定最简便常用的为台盼蓝染色法。这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，但死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞...
