临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第九章酶免疫技术第一节酶免疫技术的特点第二节酶免疫技术的分类第三节酶联免疫吸附试验第四节酶免疫测定的应用第一节酶免疫技术的特点酶免疫技术是将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术。它是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原，此结合物既保留了抗体或抗原的免疫学活性，同时又保留了酶对底物的催化活性。在酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应完成后，加入酶的相应底物，通过酶对底物的显色反应，对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析。它通过利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高了抗原抗体反应的敏感性。一、酶和酶作用底物（一）酶的要求1、酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。2、易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。3、作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。4、酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好。5、酶、辅助因子及其底物对人体无害，酶的底物易于配制、保存，酶及其底物应价廉易得。（二）常用的酶1.辣根过氧化物酶（HRP）HRP来源于蔬菜植物辣根中，分子量40kD，是由无色的糖蛋白（主酶）和亚铁血红蛋白（辅基）结合而成的复合物。辅基是酶活性基团，最大吸收峰在波长403nm处；而主酶则与酶活性无关，最大吸收峰在275nm。2.碱性磷酸酶（AP）AP是一种磷酸脂水解酶，可以从大肠杆菌或小牛肠黏膜提取，但两种来源的AP理化性质有所不同：菌源性AP分子量80kD，酶作用最适pH为8.0；肠黏膜AP分子量为100kD，最适pH为9.6；后一种AP的活性高于前者。3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）β-Gal来源于大肠杆菌，分子量540kD，最适pH6～8。因人血中缺乏此酶，以其制备的酶标志物在测定时不易受到内源性酶的干扰，从而提高特异性，被用于均相酶免疫测定中。（三）常用的底物1.辣根过氧化物酶的底物（1）邻苯二胺（OPD）0PD均以片剂或粉剂供应，临用时再溶解于相应的缓冲液中。（2）四甲基联苯胺（TMB）ELISA中应用最广泛的底物。（3）其他：5-氨基水杨酸（5-ASA）和2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）也是HRP常第1页临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》用的底物。2.碱性磷酸酶（AP）的底物常用对-硝基苯磷酸脂（p-NPP），p-NPP经AP作用后的产物为黄色...
