实验七小鼠卵母细胞的采集与形态结构观察一、实验目的•初步认识雌性小鼠的生殖器官结构组成及其位置,认识卵巢、输卵管、子宫等生殖器官;•掌握小鼠超数排卵的程序及方法;•学会输卵管壶腹部采集卵母细胞的方法。•初步认识小鼠的卵母细胞的形态结构,掌握采集卵母细胞的基础操作技能。二、实验原理--卵母细胞成熟•哺乳动物的卵子发生在卵巢的卵泡内。在卵母细胞成熟发育阶段,初级卵母细胞发生生发泡破裂(germinalvesiclebreakdown,GVBD)现象,完成第一次成熟分裂(减数分裂,以同源染色体分离为特征),并排出第一极体。一般认为,GVBD的发生和第一极体的排出是卵母细胞核成熟的标志。•之后,次级卵母细胞进行第二次成熟分裂(一般为有丝分裂,以染色单体分离为特征),并停滞在第二次成熟分裂中期。在这期间,完成胞质的最后成熟。•这时,卵泡发育成熟,将处于第二次成熟分裂中期的卵母细胞连同周围的卵丘细胞随着卵泡液排出。•排出的卵母细胞经过输卵管漏斗部进入输卵管,运行到受精部位输卵管膨大部(壶腹部)。卵母细胞只有受精后才完全成熟,完成分裂后期和末期,接着形成一个己受精的合子并放出一个小的第二极体。实验原理–超数排卵•为了在一次实验中获得较多数量的卵母细胞,需要用外源性促性腺激素,如孕马血清促性腺素(pregnantmareserumgonadotropin,PMSG)或促卵泡素(folliclestimulatinghormone,FSH)对实验母鼠进行超数排卵处理,增加其卵巢上卵泡发育、成熟的数量,再配合使用人绒毛膜促性腺素(humanchorionicgonadotropin,hCG)或促黄体素(luteinizinghormone,LH)促进卵泡的最后成熟与排卵,最后就可以从输卵管采集到较多数量的卵母细胞。•一般情况下,达到性成熟的小鼠在超排时排卵数多于成年鼠,故常用刚达到性成熟的青年母鼠进行超排。三、实验材料和用具•1、清洗用品、消毒和灭菌用品与液体配制。•2、设备与器材微量电子天平、恒温水浴锅、隔水式恒温培养箱、实体显微镜、药勺、青霉素瓶、胶布、记号笔、注射器。1mL、2mL、5mL)、针头(5号、5号半、9号)、针头盒、银子、擦镜纸、器械盘、手术剪、手术慑子、眼科剪、眼科慑子、眼科异物针、表面皿、卵母细胞吸管及胶头、检卵杯、移液器、移液器架、移液器吸头、吸头盒、酒精灯、废物瓶。•3、药品、试剂与液体生理盐水、孕马血清促性腺素(PMSG)、人绒毛膜促性腺素(hCG)、1%透明质酸酶溶液、用HEPES缓冲的含BSA的KSOM液或CZB液或加有BSA的mD-PBS液(配制100μg/mL透明质酸酶溶液)、卵母细胞操作液(5%-10...
