WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院实验一克隆载体重组子的抽提（重组质粒的提取、电泳鉴定及酶切鉴定）WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院一、实验目的•1、掌握碱裂解法提取质粒DNA。•2、掌握质粒的电泳鉴定•3、学习质粒的酶切鉴定WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院•1）碱裂解提取质粒原理：•主要利用宿主染色体DNA与质粒DNA之间的结构和大小的差异进行分离提取的。二、实验原理染色体DNA质粒DNAWenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院二、实验原理1）碱裂解提取质粒原理：主要利用宿主染色体DNA与质粒DNA之间的结构和大小的差异进行分离提取的。收集菌体并用GTE悬浮NaOHSDS裂解变性二者都沉淀加入KAC小分子蛋白大分子不溶性蛋白和残渣离心分离取上清异丙醇沉淀质粒DNA苯酚-氯仿除蛋白获得较纯净质粒染色体DNAWenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院二、实验原理2）琼脂糖凝胶电泳：agarosegel电泳是分离鉴定和纯化DNA分子的常用方法，不同浓度的琼脂糖胶可分离100bp-60kb的DNA片段，在琼脂糖电泳中，DNA迁移的速率不仅与其分子浪的对数值成反比，即分子量越大，移动速率越慢，而且还与分子构型有关。如质粒开环DNA<线性DNA<共价闭合环状DNA染色体DNA质粒DNAWenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院3）限制性核酸内切酶:是一类能够识别双链DNA分子内部的特异序列，并在识别位点或其周围产生切割作用的核酸...
