3植物组织培养的基本技术3.1培养基的成分与配制技术3.2基本操作3.3离体培养体系的建立3.1培养基的成分与配制技术成分母液配方pH值制备3.1.1基本成分1.水2.矿质元素3.碳水化合物4.生理活性物质5.生长调节剂6.附加物7.天然添加物1.水(H2O)水:可靠的水质是实验的保证可以使用以下装置:•水质软化装置•离子交换•反向渗透蒸馏离子交换设备2.矿质元素大量必需元素(加入mM量级):氮、磷、钾、钙、镁、硫微量必需元素(加入µM量级):铁、锰、硼、锌、铜、钼其他:碘、镍、钴、铝等3.碳水化合物作用:提供碳源、维持渗透压。通常碳源用蔗糖,高压灭菌后蔗糖大部分水解为葡萄糖和果糖。浓度范围1~5%,但在幼胚、茎尖、花药等培养时可达10%甚至更高。低浓度(1.5~2.5%)的糖有利于木质部的生长;高浓度(3~4%)有利于韧皮部;4.生理活性物质维生素肌醇氨基酸及其酰胺类单核苷酸维生素(0.1~10mg/L)作用:辅酶注意事项:易高温降解,过滤灭菌。硫胺素(VB1):全面促进生长。吡哆醇(VB6)烟酸(VB3)VC:抗氧化剂,防止褐变。肌醇作用:帮助活性物质发挥作用,使培养物快速生长,促进胚状体及芽的形成。一般用量:50~100mg/L。氨基酸及酰胺有机氮源、缓冲作用、调节体内平衡。甘氨酸:促进离体根的生长。丝氨酸、谷氨酰胺:有利于花药胚状体或不定芽的分化。水解酪蛋白(CH)、水解乳蛋白(LH):氨基酸混合物。5.植物生长调节剂:目前公认的已用于植物组织培养和生长操作的有六大类植物激素。它们是:生长素、细胞分裂素、赤霉素、脱落酸、乙烯和油菜素内酯。此外还有一些具有植物激素特征的化合物。天然生长素在植物中发现的天然生长素主要是吲哚-3-乙酸(IAA)。在植物分生组织区浓度很高,与许多生理反应有关。与植物组培有关的作用主要是在细胞分裂和有丝分裂过程。生长素的一个主要应用是促进生根,因此被广泛用于切段的微繁和生根培养。然而,不可忽视它可抑制根的伸长。合成生长素:最广泛使用的合成生长素:吲哚-3-丁酸IBA、α-萘乙酸(NAA)和2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-D)。通常与细胞分裂素联用。这些生长素对光、温的稳定性高于IAA,可以经高压灭菌。其余较少用的生长素包括:2-萘氧乙酸(NOA)、4-氯苯氧乙酸(4-CPA)、2-甲基-4-氯苯氧乙酸(MCPA)、2,4,5-三氯苯氧基乙酸(2,4,5-T)、3,6-二氯茴香酸(麦草畏)、4-氨基-3,5,6-三氯吡啶羧酸(毒莠定)。细胞分裂素细胞分裂素是腺嘌呤6位上的N被其他基团取代的衍生物,与生长素...