WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院生化工程学实验WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院•一、实验目的•(1)通过超氧化物歧化酶的分离纯化,了解有机溶剂沉淀蛋白质以及纤维素离子交换层析方法的原理。•(2)掌握测定超氧化物歧化酶活性和比活力的方法。•二、原理•超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase)简称SOD,它广泛存在于各类生物体内,按其所含金属离子的不同,可分为3种:Cu·Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD。•SOD催化如下反应:•O2.-+O2-+2H+→H202+02------自由基清除剂实验一、SOD酶粗酶液的分离纯化WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院分离纯化的原理（1）Mn-SOD易溶于乙醇；（2）K2HP04极易溶于水；（3）极性有机溶剂丙酮沉淀SOD;(4)纤维素阴离子交换柱纯化。WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院X＋X＋X＋X＋X＋X＋Y＋X＋Z＋X＋Y＋Z＋Z＋Y＋Y＋Y＋X＋Z＋X＋Z＋X＋Z＋Z＋X＋X＋X＋Y＋Z＋Y＋Z＋Ｘ＋Ｘ＋X＋X＋X＋X＋Ｚ＋X＋Ｚ＋X＋X＋OH－nX＋平衡上样吸附洗杂洗脱离子交换法离子交换法（（22）根据）根据分子电离性质分子电离性质的差异性进行分离。如离子交换法，电泳法，等的差异性进行分离。如离子交换法，电泳法，等电聚焦法。电聚焦法。WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院WenZhouMedicalCollegeWenZhouMedicalCollege检验医学院、生命科学学院检验医学院、生命科学学院•三、实验步骤：1、粗酶液的获得：收集50mL发酵液菌体，离心收集菌体。15mL磷酸钾缓冲液重悬菌体，并加入75ulTriton冰上裂解菌体10min，超声破碎（400w,5’’-3’’,90次），8000rpm离心10’，上清即为SOD粗酶液,取上清12ml（留样1mL测酶活和蛋白含量--A）。2、氯仿去蛋白：上清中缓...
