ChapterChapter1010沉析沉析PrecipitationPrecipitation本章应掌握的问题1、什么是沉析？2、沉析法纯化蛋白质的优点有哪些？3、沉析的一般操作步骤是什么？4、何谓盐析？其原理是什么？5、盐析操作时常用的盐是什么？6、影响盐析的主要因素有哪些？7、有机溶剂沉析法的原理是什么？8、影响有机溶剂沉析的主要因素有哪些？9、等电点沉析的工作原理是什么？10、其它常用的沉析方法有哪些？沉析法概念（Precipitation）利用沉析剂使需提取的生化物质或杂质在溶液中的溶解度降低而形成无定形固体沉淀的过程。操作步骤1加入沉析剂2沉析物沉化3离心或过滤，收集沉析物沉淀与结晶的区别相同点本质过程都属于新相析出，以物理变化为主，也有极少的有化学反应的沉淀或结晶。不同点结晶析出的分子或离子具有有规则的排列形式沉淀析出的分子或离子呈无规则的紊乱排列形式沉析器结晶器沉析的特点操作简单、经济、浓缩倍数高，但针对复杂体系而言，纯度不高、选择性不强分类盐析、有机溶剂沉析、等电点沉析等沉淀的本质一个溶质与溶剂之间关系的交变过程，通过加试剂，改变溶剂和溶质的能量平衡来降低其溶解度。沉淀法适用范围（参考图15.1）主要用于蛋白质、核酸等沉淀，蛋白质或核酸在溶液中浓度较高或终产物要求的纯度不高的情况。通过多步沉淀可达99%的纯度。IgG蛋白质的结构蛋白质的结构一级结构二级结构三级结构蛋白质的溶解特性三级结构蛋白质的溶解特性图16.2蛋白质分子表面的憎水区域和荷电区域表16.1根据疏水性与化学性质对氨基酸的分类表亲水和疏水区域的分布和程度决定蛋白质在水相环境中的溶解度1.带电荷的和极性的氨基酸亲水性最强，疏水性最小2.小分子蛋白质比在化学上类似的大分子蛋白溶解性高3.蛋白质通过改变其结构如疏水基团暴露出来改变不溶解性蛋白质的溶解特性表16.2影响蛋白质溶解度的参数蛋白质本身的性质极性/非极性残基分布溶剂可利用度溶剂化沉淀平衡蛋白质胶体溶液的稳定性蛋白质胶体溶液的稳定性遵循DEVL理论：蛋白质胶粒间的范德华力（吸引力）和胶粒与液体界面存在的静电斥力平衡为基础蛋白质的沉淀方法1，加入中性盐2，将PH值调到IP3，加入可溶性有机溶剂4，加入非离子型亲水性聚合物5，加入聚电解质絮凝6，加入多价金属离子生物大分子在水溶液中的存状态：（1）两性电解质，由于静电力的作用，分子间相互排斥，形成稳定的分散系----胶体蛋白（2...
