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按学号入座讲台医学免疫学实验课免疫学教研室崔畅婉实验课占总成绩30%,其中实验设计20%,课堂表现10%准时,注意课堂纪律穿白大衣贵重物品随身携带爱惜实验室设备和器材注意水、电、煤气认真做实验记录课后恢复实验台初始状态分组值日要求选择适当量程的加样器P20:0.5~20.0µlP200:20~200µlP1000:200~1000µl转动旋钮,调整量取体积顺时针旋转增加体积逆时针减少体积禁止超出量程范围,否则会损坏加样器拇指操作加样器芯,其它四指弯曲握住加样器加样枪使用方法及注意事项安装相应的枪头白色P20黄色P200蓝色P1000注意无菌操作按加样器芯时会遇到两个阻力点到达第一个阻力点时为量取液体的体积只在完全排出液体时才使用第二个阻力点吸取液体时只需按到第一个阻力点实验完成之后,将加样器调至最大量程加样器使用方法及注意事项操作步骤加包被液(SRBC)每孔100μl,37℃40min洗板2次,弃上清,加封闭液,每孔200μl37℃,1小时弃去孔中液体,洗板1次每2名同学1条反应板,在板子侧面标学号拍干板条,4℃保存备用实验内容试剂与材料绵羊红细胞(SRBC)裂解液封闭液(5%BSA/PBS溶液)洗涤液(PBS+Tween,pH7.4)一、ELISA实验准备(包被、封闭)YYYYYYYYYYYYYYSRBC碎片—AgYY待测血清-Ab酶标二抗底物产物用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部,放在铁笼上,小鼠自然向前挣扎用左手食指和拇指捏住小鼠头部两边疏松的皮肤提起小鼠用左手小指和无名指压住小鼠尾部,固定小鼠注意:小鼠尾巴的尾端容易断裂,抓小鼠应抓尾巴中部或根部小鼠抓取方法小鼠的抓取及固定(1)(2)(3)左手提起并固定小鼠,使鼠腹部朝上右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺,针头刺入皮肤后进针3mm左右使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌,穿过腹肌进入腹膜腔,当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后阻力消失,有落空感固定针头,保持针尖不动,回抽针栓,如无回血、肠液或尿液后即可注射腹腔注射(看录像)小鼠标记(苦味酸)4人一组(先发PBS对照,同时1ml绵羊血,离心2000rpm,6min做完后发SRBC)2人一只小鼠实验组:腹腔注射2%的SRBC1ml对照组:腹腔注射PBS1ml二、小鼠腹腔免疫小心吸弃上清,留红细胞沉淀加入1mlPBS混匀即为2%绵羊红细胞悬液绵羊红细胞(SRBC)的制备注射之前排空注射器中的空气SRBC使用之前要混匀小鼠会咬人,一定固定好头部最好一次成功...

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