免疫学教研室崔畅婉本次实验内容1.眼球取血，血清分离2.脾细胞制备TT致敏T细胞抗体BB浆细胞实验设计实验1血清分离——眼球取血一、实验材料•免疫两周的小鼠（两人一只）•眼科弯镊子•麻醉剂（水合氯醛）•1ml注射器•1.5ml离心管眼球取血方法•小鼠腹腔注射麻醉剂0.4ml•2min后抓住小鼠颈部皮毛，轻压在鼠笼上•弯镊压入眼球深部带着结缔组织，匀速夹出眼球。•用微量离心管接住流出的血液，标记自己学号•采血量尽量多•竖直静置2小时观看眼球取血录像脾细胞分离材料•免疫两周的小鼠•PBS（磷酸盐缓冲液）•70%酒精•细胞裂解液（0.17mol的NH4Cl）•动物解剖器械（平镊、齿镊、剪刀）•注射器（5ml）、平皿、Ep管、15ml离心管、离心机取脾•将眼球取血后的小鼠颈椎脱位法处死•70%酒精浸湿皮毛，右侧卧位•左侧肋骨最低点与髋关节间做2.5cm切口•镊子钝性分离结缔组织，暴露腹膜•腹膜做2cm切口，暴露脾脏•分离结缔组织和系膜•脾脏放入5mlPBS的平皿中冲洗法提取脾细胞•平镊轻轻夹住脾•注射器吸取平皿中5mlPBS，匀速注射入脾脏，冲洗脾细胞•拔掉针头用注射器吸取平皿中PBS，插上针头刺入脾脏冲，反复冲洗3次，脾脏由暗红色变为白色•把所获得的细胞悬液收集到离心管内，PBS补齐至8ml注意事项•脾脏很脆，一定要用平镊轻夹•分清脾脏和肝脏•冲洗脾细胞时针头不能穿透脾脏•倾倒上清时沉淀贴壁面朝上，可剩余少量上清，防止误倒细胞•红细胞裂解液4℃保存•解剖器械用后及时清洗观看取脾视频脾细胞悬液制备•1500rpm离心10min，去上清•加2ml红细胞裂解液，悬起细胞，可用加样器吹打混匀细胞，室温静止5min，•加6mlPBS后，1500rpm离心5min，去上清•5ml的PBS悬浮细胞，2000rpm离心10min，去上清•1ml的PBS悬浮细胞脾细胞计数材料•细胞计数板•盖玻片•显微镜•微量加样器细胞计数板细胞浓度=稀释倍数×4个方格的平均数×104/ml脾细胞计数规则脾细胞计数方法•盖玻片盖好计数板•取10μl注入计数板与盖玻片夹层•40X物镜下计数细胞•计算细胞原液浓度•调整细胞浓度至2×l06/ml收集血清•10000rpm离心10min•微量加样器沿管壁缓慢吸取上清并转移至新Ep管，标记•保存在－20℃冰箱备用•注意勿将红细胞吸出试验台回复初始状态！！！•平皿、鼠板平皿、鼠板冲洗干净倒放在实验台上；•15ml15ml离心管离心管冲洗干净倒放在试管架上；•5ml5ml注射器注射器冲洗干净倒放在试管架上；•红细胞裂解液、麻醉剂、红细胞裂解液、麻醉剂、PBSPBS上交；...
