第八章哺乳动物基因工程Greenfluorescentmouse高等哺乳动物基因工程高等哺乳动物细胞基因表达技术高等哺乳动物转基因技术转基因动物个体动物工程细胞哺乳动物遗传性状改良药物筛选研究评价模型人体基因治疗蛋白多肽物质大规模生产药物筛选研究评价模型研究哺乳动物基因功能的基础：第一，必须能通过克隆分离出基因。；第二，必须能在试管里操作基因序列；第三，必须能够将改变过的基因重新送入细胞里以确定它是如何发挥功能的。其中第三方面以多种形式形成阻止人们前进的障碍。第一节哺乳动物基因转移的遗传选择标记常用的选择基因有：胸苷激酶基因（tk）、二氢叶酸还原酶基因(dhfr)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、细菌的黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(Eco-gpt)、细菌的新霉素磷酸转移酶基因(Eco-neo)等。嘌呤嘧啶的生物合成二氢叶酸还原酶腺嘌呤磷酸核糖基转移酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸转移酶黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸转移酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸转移酶二氢叶酸还原酶胸苷激酶互补选择的分子基础：适当的使用这些抑制物，我们可以选择性的控制某一个合成途径。这就是说，当细胞的一种代谢途径发生缺陷时，可以从另一种代谢途径得到补偿，从而能继续存活，因此容易得到突变体；但是，另一种代谢途径也被一种特殊的药物所阻断时除非导入野生型基因取代突变的基因，否则细胞就会死亡。另一方面，有一些对抑制补救合成途径的药物呈抗性的基因，在没有补救前体合成的情况下，也可以用作显性选择标记。选择原理：tk(thymidinekinase)基因及hprt基因的筛选：受体细胞必须是相应的tk-或hprt-，将细胞培养在含HAT（H：hypoxanthine黄嘌呤，A：aminopterin氨甲喋呤，T：thiymidine胸苷）的培养基中。在A存在下，核苷酸的从头合成途径被阻断，不能合成AMP、TMP及GMP。这三中核苷酸的合成只能有补偿途径合成，必须具有tk或hprt基因的存在细胞才可生长。5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）次黄嘌呤核苷一磷酸（HMP）次黄嘌呤核苷（HR）GMPAMP嘌呤核苷酸生物合成途径次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HPRT）氨甲喋呤（AP）氨甲喋呤（AP）从头合成途径补救合成途径尿嘧啶核苷一磷酸（UMP）胸腺嘧啶核苷一磷酸（TMP）胸腺嘧啶核苷（TR）嘧啶核苷酸生物合成途径（TK）胸腺嘧啶核苷激酶dhfr（dihydrofolatereductase，二氢叶酸还原酶）基因的筛选：受体细胞必须是dhfr-，将细胞培养在含HT的培养基中。真核细胞核苷酸的合成需要四氢叶酸提供甲基。7,8二氢叶酸+NADPH+H+5,6,7,8四氢叶酸+NADP...
