D基因工程菌的遗传不稳定性及其对策D基因工程菌的遗传不稳定性及其对策第六章（1）大肠杆菌基因工程第六章（1）大肠杆菌基因工程C大肠杆菌基因工程菌的构建策略C大肠杆菌基因工程菌的构建策略B外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理B外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理A大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征A大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征E利用重组大肠杆菌生产人胰岛素E利用重组大肠杆菌生产人胰岛素A大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征A大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征5大肠杆菌基因工程5大肠杆菌基因工程大肠杆菌表达外源基因的优势大肠杆菌表达外源基因的优势全基因组测序，共有4405个开放型阅读框架全基因组测序，共有4405个开放型阅读框架基因克隆表达系统成熟完善基因克隆表达系统成熟完善繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物A大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征A大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征5大肠杆菌基因工程5大肠杆菌基因工程大肠杆菌表达外源基因的劣势大肠杆菌表达外源基因的劣势缺乏对真核生物蛋白质的复性功能缺乏对真核生物蛋白质的复性功能缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白细胞周质内含有种类繁多的内毒素细胞周质内含有种类繁多的内毒素B外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理B外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理5大肠杆菌基因工程5大肠杆菌基因工程启动子启动子终止子终止子核糖体结合位点核糖体结合位点密码子密码子质粒拷贝数质粒拷贝数启动子启动子启动子最佳距离的探测启动子最佳距离的探测目的基因目的基因EEEEAAEEEE启动子启动子A酶切开A酶切开Bal31酶解Bal31酶解目的基因目的基因启动子启动子启动子的筛选启动子的筛选AprAproriorigalKgalKpKO1pKO1终止密码子终止密码子采用鸟枪法战略，将合适大小的DNA片段采用鸟枪法战略，将合适大小的DNA片段克隆到启动子探针质粒pKO1上克隆到启动子探针质粒pKO1上受体细胞染色体DNA上的galE、galT与质受体细胞染色体DNA上的galE、galT与质粒上报告基因galk的表达产物联合作用，粒上报告基因galk的表达产物联合作用，可将培养基中的半乳糖酵解成红色素物质可将培养基中的半乳糖酵解成红色素物质转化galE+...
