NSFC案例精讲班(七)解螺旋课堂2017酸菜解螺旋课堂0课程内容文献案例分析科学假设模式132标书写作讲解解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析Fig.1，3Fig.1Fig.1-5Fig.4Fig.4，5Fig.5Fig.3-5Fig.2启动子荧光素活性染色质免疫沉淀免疫共沉淀解螺旋课堂1文献案例分析肝癌ZEB2EMT转移FOXO1科学假设：逻辑思路：AFOXO1迁移表型Fig.1BFig.2，3FOXO1EMT迁移表型CFig.3TGF-β迁移粘附DFOXO1Fig.4肺转移灶数目EFOXO1ZEB2Fig.5EMT迁移表型/动物验证解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析A.RYBPmRNA表达水平B.预测RYBP基因启动子区域CpG岛C.RYBP5’非编码区及预测的转录调控元件(ALGGEN,TFSEARCH，JASPAR)D.不同肝癌细胞的RYBP启动子区域多态性E.不同肝癌细胞的RYBP启动子区域CpG岛甲基化状态F.荧光素酶报告系统检测不同肝癌细胞中RYBP启动子活性解螺旋课堂1文献案例分析A.RYBP启动子序列缺失突变及其转录活性检测B.分析候选转录因子对RYBP的转录活性调节作用（Ets-1，KLF4，Mzf-1，Nkx2-5，YY-1，Sp1）C.检测Sp1，KLF4和RYBP在肝癌细胞株中的表达相关性解螺旋课堂1文献案例分析A.KLF4对RYBP启动子活性的调控B.过表达KLF4诱导RYBPmRNA上调C.过表达KLF4诱导RYBP蛋白上调D.siRNA沉默KLF4诱导RYBPmRNA下调E.siRNA沉默KLF4诱导RYBP蛋白下调解螺旋课堂1文献案例分析A.Sp1对RYBP启动子活性的调控B.过表达Sp1诱导RYBPmRNA下调C.过表达Sp1诱导RYBP蛋白下调D.siRNA沉默Sp1诱导RYBPmRNA上调E.siRNA沉默Sp1诱导RYBP蛋白上调解螺旋课堂1文献案例分析A.ChIP实验证实KLF4和Sp1与RYBP启动子DNA结合B.位点突变验证KLF4/Sp1与RYBP启动子的结合位点的策略C.验证突变体KLF4与RYBP启动子的结合位点活性D.验证突变体Sp1与RYBP启动子的结合位点活性E.突变体+转染野生型KLF4F.突变体+转染野生型Sp1G.确认RYBP启动子上转录调控位点（不同物种序列保守）解螺旋课堂1文献案例分析A.过表达KLF4/Sp1肝癌Huh7细胞MTS存活实验B.HepG2细胞再来一遍C.Sp1过表达+SYBR沉默观察克隆形成表型解螺旋课堂1文献案例分析解螺旋课堂1文献案例分析肝癌RYBP细胞增殖生长KLF4/Sp1科学假设：逻辑思路：ARYBP启动子Fig.1BFig.2RYBP启动子KLF4/Sp1CFig.3KLF4RYBP正DSp1Fig.4RYBP负ERYBP启动子Fig.5位点KLF4/Sp1FFig.7表型临床Fig.6解螺旋课堂2科学假设模式延伸机制疾...
