免疫组化操作步骤（一）、仪器设备1.18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.2.水浴锅（二）、试剂1.PBS缓冲液（ph7.2―7.4）：NaC137mmol/L，KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/L,KH2PO41.4mmol/L.2．0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）：柠檬酸三钠3g,柠檬酸0.4g。3．0.5mol/LEDTA缓冲液（ph8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA&8226;2H2O,用10mmol/LNaOH调至ph8.0,加水至1000ml.4.1mol/L的TBS缓冲液（ph8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至ph8.0,加水1000ml。5.酶消化液：a.0.1%胰蛋白酶：用0.1%CaCl12(ph7.8)配制。b.0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。6.3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制7.风裱剂：a.甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（ph9.0–9.5）等量混合b油和TBS(PBS)配制8．TBS/PBSPH9.0–9.5,适用于荧光纤维镜标本;ph7.0-7.4适合光学纤维标本（三）、操作流程1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。a组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟,更换二甲苯后在浸泡10分钟b无水乙醇中浸泡五分钟c95%乙醇中浸泡五分钟d75%乙醇中浸泡五分钟2、抗原修复：用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片：A抗原热修复a高压热修复在沸水中加入EDTA(ph8.0)或0.01m枸橼酸钠缓冲溶液（ph6.0）.盖上不锈钢锅盖，但不能锁定。将玻片置于金属染色加上，缓慢加压，是玻片在缓冲液中浸泡五分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后除去热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。b沸热修复电炉或水浴锅加热0.01枸橼酸钠缓冲液（ph6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10-15分钟。c微波炉加热在微波炉里加热0.01枸橼酸钠缓冲液（ph6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5-10分钟，反复1-2次。适用的抗原Bcl-2.Bax.AR.PR.C-fos.x-jum.z-kit.c-myc.E-cadherin.ChromograninA.Cyclin.ER.Heatshock.Protein.HPV.Ki-67.MDMZ.P53.P34.P15.P-glycoprotein.PKC.PCNA.ras.Rb.等B酶消化方法常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热37℃，消化时间约为5-30分钟。适用于被固定遮蔽的抗原：包括Collagen.GFAP.Complement.Cytokeratin.C-erB-2.LCA.LN.等3、免疫组化染色SP法（1）脱蜡、水化（2）PBS洗2-3次各5分钟（3）3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室温静置10分钟（4）PBS洗2-3次各5分钟（5）抗原修复（6）PBS洗2-3次各5分钟（7）滴加正常山羊血清封闭液，...
