黑龙江八一农垦大学学报第35卷收稿日期：2021-04-28基金项目：黑龙江八一农垦大学博士科研启动基金（XDB2015-18）。作者简介：张宁（1997-），女，黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院2019级硕士研究生。通信作者：肖莉杰，女，副教授，硕士研究生导师，E-mail：371579562@qq.com。PEDVnsp15基因真核表达载体的构建及蛋白的表达张宁1，郑亮1，2，杨超玥1，吴志军1，张华1，曹宏伟1，肖莉杰1（1.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆163319；2.黑龙江八一农垦大学动物科技学院）摘要：猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）含有一种名为Nsp15的非结构蛋白，为了研究Nsp15蛋白在侵染宿主细胞时产生的作用，成功构建了PEDVNsp15基因的真核表达载体。通过PCR技术扩增Nsp15基因片段，经双酶切连接到pCMV-Myc载体上，酶切鉴定及测序结果证实PEDVNsp15基因成功克隆到pCMV-Myc载体中，并将重组质粒命名为pCMV-Myc-Nsp15。将重组质粒pCMV-Myc-Nsp15转染至IPEC-J2细胞中，利用WesternBlot和间接免疫荧光技术检测pCMV-Myc-Nsp15的表达以及定位情况。结果显示，pCMV-Myc-Nsp15在IPEC-J2细胞中成功表达，并且在胞质胞核均匀分布。为进一步研究PEDVNsp15蛋白的功能奠定基础。关键词：猪流行性腹泻病毒；真核表达载体；非结构蛋白15中图分类号：S858.26；Q786文献标识码：A文章编号：1002-2090（2023）01-0072-06ConstructionofEukaryoticExpressionVectorandProteinExpressionofPEDVNsp15GeneZhangNing1，ZhengLiang1，2，YangChaoyue1，WuZhijun1，ZhangHua1，CaoHongwei1，XiaoLijie1（1.CollegeofLifeScienceandTechnology，HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity，Daqing163319；2.CollegeofAnimalScienceandTechnology，HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity）Abstract：Porcineepidemicdiarrheavirus（PEDV）containsanonstructuralproteincalledNsp15.InordertostudytheroleofNsp15proteinintheinfectionofhostcells，theeukaryoticexpressionvectorofPEDVNsp15genewasconstructed.Nsp15genefragmentwasamplifiedbyPCR，andwaslinkedtopCMV-mycvectorbydoubleenzymedigestion.TheresultsofenzymedigestionidentificationandsequencingconfirmedthatPEDVNsp15genewasclonedintopCMV-Mycvector，andtherecombinantplasmidwasnamedpCMV-Myc-Nsp15.TherecombinantplasmidpCM-Myc-Nsp15wastransfectedintoIPEC-J2，andtheexpressio...
