生命科学版），2023，44（4)：59-67.引文格式：朱怡，严晨啸，杨玉妍，等.串联荧光标记LGG-1检测秀丽线虫表皮自噬流.扬州大学学报（农业与Jul.2023JournalofYangzhouUniversity(AgriculturalandLifeScienceEdition)2023年7月Vol.44No.4扬州大学学报（农业生命科学版）第44卷第4期DOI:10.16872/j.cnki.1671-4652.2023.04.008串联荧光标记LGG-1检测秀丽线虫表皮自噬流朱怡"，严晨啸1-2，杨玉妍1."，傅容1*（1.苏州大学生物医学研究院，江苏苏州215123；2.南京医科大学基础医学院，南京211166；3.苏州贝康医疗器械有限公司，江苏苏州215123)摘要：为建立特异性检测线虫表皮细胞自噬流的工具，以利研究自噬在发育、免疫和结构损伤等方面的作用，利用表皮特异性启动子DPY-7P构建表皮特异性表达串联荧光标记的LGG-1/LC3的转基因虫株（DPY-7P：:GFP：:mCherry：：LGG-1)；然后根据GFP和mCherryPH稳定性的差异设计通过测量红绿信号比值判断自噬小体和自噬溶酶体的方法；并通过RNAi敲降自噬调节因子LET-363/mTOR和RAB-7/RAB7A，验证了该报告系统的定量方法可有效反映自噬流的激活和阻断。进一步利用该报告系统证实表皮机械损伤可在远离伤口的区域诱发自噬，并发现机械损伤可能激活伤口附近的溶酶体。综上，该报告系统可为深入探究表皮自噬的机制与生理意义提供有效的研究工具。关键词：秀丽隐杆线虫；表皮细胞；自噬流；串联荧光标记LGG-1/LC3中图分类号：R392文献标志码：A文章编号：1671-4652（2023)04-0059-09MonitoringtheautophagicfluxoftheCaenorhabditiselegansepidermisbytandemfluorescent-taggedLGG-1ZHUYi',YANChenxiaol2,YANGYuyanl.3,FURong'(1.InstituteofBiologyandMedicalSciences,SoochowUniversity,Suzhou215123,China;2.SchoolofBasicMedicalSciences,NanjingMedicalUniversity,Nanjing211166,China;3.SuzhouBasecareMedicalDeviceCompanyLimited,Suzhou215123,China)ABSTRACT:InordertoestablishaspecifictooltodetecttheautophagicfluxoftheCaenorhabditiselegansepidermisindevelopment,immunity,structuraldamageandotherbiologicalprocesses,weconstructedatransgenicstrainDPY-7P::GFP::mCherry::LGG-1inwhichtandemfluorescent-taggedLGG-1wasspecificallyexpressedintheepidermis.BasedondifferentpHstabilityofmCherryandGFPfluorescentproteins,theratioofmCherrytoGFPfluorescencewasusedtodistinguishautophagosomesfromaut...
