第44卷总第131期2023年9月西北民族大学学报（自然科学版）JournalofNorthwestMinzuUniversity(NaturalScienceEdition)Vol.44,No.3Sep,2023KP-10对绵羊卵泡颗粒细胞增殖及凋亡相关基因表达的作用研究时小凤1，袁肇方1，黄一迪1巩转娣（1.西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州730030；2.西北民族大学医院，甘肃兰州730030)［摘要］目的：探讨Kisspeptin-10(KP-10)对绵羊卵泡颗粒细胞（FGCs)CCND1、CDK6、Bcl-2、THBS1、TNC和Bax基因表达的影响.方法：将分离培养的原代FGCs细胞在含不同浓度（0、10、100和1000nmol/mL)KP-10培养基中培养，分别标记为CG组、EP-1组、EP-2组和EP-3组，采用CCK-8法检测FGCs的细胞活性，筛选出KP-10对FGCs增殖的最佳浓度与时间.采用RNA-seq技术进行转录组测序分析，应用实时荧光定量PCR(qPCR)和WesternBlot方法进行验证.结果：与CG组比较，48h时EP-2组FGCs细胞活力极显著增强（P<0.01).转录组测序显示CG组和KP组间存在202个差异表达基因，其中上调基因119个，下调基因83个.qPCR和WesternBlot结果表明,KP组CCND1、CDK6、Bcl-2基因表达显著上调(P<0.05);Bax、THBS1、TNC基因表达显著下调（P<0.01;P<0.05),与转录组测序结果基本一致.WesternBlot验证结果与qPCR检测结果表明,KP组BAX蛋白、THBS1蛋白、TNC蛋白表达水平极显著降低（P<0.01),CCND1蛋白、BCL-2蛋白和CDK6蛋白水平均显著升高（P<0.05或P<0.01).结论：KP-10可促进绵羊FGCs增殖及凋亡相关基因表达.KP可以降低BAX、THBS1、TNCmRNA及蛋白表达，提高CCND1、BCL-2、CDK6mRNA及蛋白表达.［关键词］绵羊；卵泡颗粒细胞;RNA-Seq;Kisspeptin-10［中图分类号］S826.1[文献标识码］A［文章编号］1009-2102(2023)03-0054-080引言绵羊产业在我国现代畜牧业中占据重要地位，而绵羊繁殖性能的高低对绵羊的产业化规模发展有着直接影响.绵羊的季节性繁殖特性及其常见的空怀、流产等繁殖性疾病严重地阻碍了绵羊产业的发展.卵巢是成年雌性哺乳动物体内最重要的生殖器官，颗粒细胞是卵巢卵泡中最重要的体细胞之一，它可以通过自分泌和旁分泌的形式与各种细胞互相交流，在自身增殖和分化的同时，也为卵母细胞提供成熟所需的营养[1].Kisspeptin(KP)是由KISS-1基因编码的一种多肽类激素，在蛋白酶的作用下水解成长短不同且具有生物活性的酰胺化肽段，包括Kisspeptin-54（KP-54）、Kisspeptin-14（KP-14）、Kisspeptin-13（KP-13）和Kisspenptin-10(KP-10)[21.Leel3I等首次在人黑色素瘤细...
