第39卷第2期2023年3月病毒学报CHINESEJOURNALOFVIROLOGYVol.39No.2March2023人呼吸道合胞病毒感染性克隆构建及其验证宋晶晶，毛乃颖，李海，朱武洋，许文波，张燕*（国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，世界卫生组织西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室，北京102206）摘要：人呼吸道合胞病毒（Humanrespiratorysyncytialvirus，HRSV）是引起全球婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原体。本研究旨在建立HRSV原型株Long毒株的反向遗传操作系统。通过利用细菌人工染色体（Bacterialartificialchromosome，BAC）为载体骨架构建HRSV的Long毒株全长质粒（Long‐BAC），以pcDNA3.1为载体构建分别表达HRSVN、P、M2‐1和L蛋白（pcDNA3.1‐N，pcDNA3.1‐P，pcDNA3.1‐M2‐1和pcDNA3.1‐L）的四个辅助质粒，将五个质粒共转染于表达T7RNA聚合酶的BSRT7/9细胞系进行病毒拯救。采用间接免疫荧光（Immunefluorescenceassay，IFA）和测序方法对拯救的病毒进行鉴定，并评价其在细胞和动物水平的生物学特征。本研究首次成功构建以BAC载体为骨架的HRSV原型株Long感染性克隆，拯救的病毒在不同代数测序结果显示无突变，能够稳定传代，病毒滴度为3×106PFU/mL；与实验室保存野生型Long株（Long‐WT）相比具有相似的细胞生长动力学特性，在12~36h病毒呈指数增长，在36h复制达到最高峰；在感染小鼠后能引起明显的肺部病理变化以及炎性相关细胞因子升高。本研究建立了高效、稳定的HRSV反向遗传学系统，为我国HRSV致病机制研究、疫苗和抗体药物研发提供技术平台。关键词：人呼吸道合胞病毒；反向遗传学；负链RNA病毒中图分类号：R373.1文献标识码：A文章编号：1000‐8721（2023）02‐0334‐10DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004286人呼吸道合胞病毒（Humanrespiratorysyncytialvirus，HRSV）是引起婴幼儿急性下呼吸道感染（Acutelowerrespiratorytractinfection，ALRTI）最重要的病毒病原体。据估计，2019年全球5岁以下儿童约3300万感染HRSV‐ALRTI，其中360万例需住院治疗，导致超过2.6万例死亡病例［1］。全球HRSV暴发疫情时有发生［2‐7］，严重影响公共卫生健康，但至今仍无批准的疫苗上市［8］。HRSV属于肺炎病毒科，正肺病毒属，为非节段性单股负链RNA病毒，基因组全长约15kb，包含10个基因，编码11种蛋白［9］。其中N蛋白、P蛋白、M2‐1蛋白和L蛋白是病毒组装和出芽所不可或缺的结构蛋白。N蛋白、P蛋白和L蛋白与病毒...
