第４２卷第１期２０２３年２月电子显微学报ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＥｌｅｃｔｒｏｎＭｉｃｒｏｓｃｏｐｙＳｏｃｉｅｔｙＶｏｌ４２，Ｎｏ１２０２３⁃０２文章编号：１０００－６２８１（２０２３）０１－００３０－０９冷冻电镜研究野生型ＤｅｇＰ降解底物的构象变化秦逸澄１，刘蕴辉２，沈庆涛１，３∗（１．上海科技大学生命科学学院，上海２０１２１０；２．青岛海洋科学与技术国家实验室，山东青岛２６６００５；３．南方科技大学生命科学学院，广东深圳５１８００５）摘要研究生物大分子结构的动态变化是结构生物学未来发展的重要方向之一，冷冻电镜的三维结构分类技术为实现这一目标提供了可能。本研究以大肠杆菌蛋白酶ＤｅｇＰ为研究对象，利用冷冻电镜三维分类技术解析了低温和热休克温度下野生型ＤｅｇＰ降解底物的不同构象，比较了不同温度下野生型ＤｅｇＰ寡聚状态的变化，指出了相较于酶活丧失突变体，野生型ＤｅｇＰ包裹底物后具有更高的结构柔性。该研究成果为热休克条件下ＤｅｇＰ通过寡聚降解底物提供了直接证据。关键词高温冷冻电镜；ＤｅｇＰ笼状结构；动态过程中图分类号：Ｑ７；Ｑ７１；Ｑ３３６文献标识码：Ａｄｏｉ：１０３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－６２８１２０２３０１００５收稿日期：２０２２－１０－２３；修订日期：２０２３－０１－０９基金项目：科技部重点研发项目（Ｎｏ．２０２１ＹＦＦ１２００４０３）；国家自然科学基金面上项目（Ｎｏ．３１８７０７４３）．作者简介：秦逸澄（１９９６－），女（汉族），上海人，硕士．Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｑｉｎｙｃｈ２３＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ∗通讯作者：沈庆涛（１９７９－），男（汉族），山东人，副教授，研究员．Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｓｈｅｎｑｔ＠ｓｕｓｔｅｃｈ．ｅｄｕ．ｃｎ冷冻电镜技术（Ｃｒｙｏ⁃ｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，Ｃｒｙｏ⁃ＥＭ）是重要的结构生物学研究方法，它与另外两种技术，Ｘ射线晶体学（Ｘ⁃ｒａｙｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ）和核磁共振（ｎｕｃｌｅａｒｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅ，ＮＭＲ）一起构成了高分辨率结构生物学研究的基础，是获得生物大分子的结构并揭示其功能的重要研究手段。单颗粒冷冻电镜（ｓｉｎｇｌｅ⁃ｐａｒｔｉｃｌｅＣｒｙｏ⁃ＥＭ，ＳＰＡ）是指将纯化后的生物大分子复合物进行冷冻制样、透射电镜大数据收集、以及三维图像重构结合在一起来解析高分辨率结构的前...
