第49卷第2期2023年3月吉林大学学报（医学版）JournalofJilinUniversity（MedicineEdition）Vol.49No.2Mar.2023DOI：10.13481/j.1671⁃587X.20230206卡氏棘阿米巴肌动蛋白1的免疫学特性和细胞黏附功能李晶1,杨舒越1,赵佳欣1,孔繁利1,郭思瑶2,冯宪敏2（1.北华大学基础医学院病理生理教研室，吉林吉林132013；2.吉林医药学院基础医学院病原生物学教研室，吉林吉林132013）［摘要］目的目的：探讨卡氏棘阿米巴（Ac）肌动蛋白1（Actin1）（Ac-Actin1）的免疫学特性，初步阐明Ac-Actin1介导Ac虫体黏附宿主细胞并参与Ac虫体入侵的作用。方法方法：以Ac滋养体cDNA为模板，构建原核表达载体pET22b（+）-Ac-Actin1，转化大肠埃希菌感受态细胞BL21（DE3）；1mmol·L－1异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）体外诱导表达重组Ac-Actin1蛋白（rAc-Actin1），十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对rAc-Actin1进行可溶性分析，通过亲和层析方法纯化带有His标签的rAc-Actin1。3只新西兰白兔随机分为对照组（1只）和实验组（2只）；实验组兔以rAc-Actin1为免疫原皮下注射400μg，对照组兔注入等量生理盐水，制备抗rAc-Actin1多克隆兔血清；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测2组兔抗rAc-Actin1多克隆抗体效价并测定IgG亚型，Westernblotting法检测抗rAc-Actin1多克隆兔血清与rAc-Actin1的免疫反应性，间接免疫荧光实验（IFA）检测Ac-Actin1在Ac滋养体中的定位。以正常滋养体为对照，抗rAc-Actin1多克隆兔血清阻断Ac滋养体后与Vero细胞共孵育，显微镜观察Ac-Actin1对Vero细胞的黏附作用。结果结果：SDS-PAGE和BCA蛋白浓度检测，获得高浓度rAc-Actin1（1.7g·L－1）蛋白。ELISA法检测，制备的兔抗rAc-Actin1特异性多克隆抗体效价为1∶6400，IgG1和IgG2a浓度分别为116.76g·L－1和1136.15mg·L－1。Westernblotting法检测，兔抗rAc-Actin1多克隆抗体可与rAc-Actin1发生特异性结合，具有良好的免疫反应性。IFA检测，rAc-Actin1主要定位于Ac滋养体的细胞膜上。显微镜观察，与对照组比较，随着抗体与虫体孵育时间的延长，实验组Ac滋养体对Vero细胞的黏附率明显降低（P<0.01），抗rAc-Actin1特异性多克隆抗体可有效阻断Ac滋养体与Vero细胞的黏附。结论：rAc-Actin1具有良好的免疫原性和免疫反应性，参与Ac虫体与宿主细胞的黏附作用。［关键词］卡氏棘阿米巴；滋养体；细胞黏附；免疫原性；免疫反应性［中图分类号］R382.1［文献标志码］AImmunologicalcharacteristicsand...
