中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２１２５—２００８李痘病毒检疫鉴定方法犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犘犾狌犿狆狅狓狏犻狉狌狊２００８０９０４发布２００９０３１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售前言本标准的附录Ａ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陈定虎、王章根、李明福、胡学难、李桂芬、王秀芬、冯黎霞、管维。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２１２５—２００８版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售李痘病毒检疫鉴定方法１范围本标准规定了李痘病毒检疫和鉴定的基本原则和方法。本标准适用于带有李痘病毒的所有进出境的无性繁殖材料、组培苗、种子和果实的检疫鉴定。２原理李痘病毒学名：Ｐｌｕｍｐｏｘｖｉｒｕｓ（ＰＰＶ），别名：Ｓｈａｒｋａｖｉｒｕｓ，是核果类果树危险性最大的病毒之一，其外壳蛋白的特异性和核酸序列的特殊性是本标准制定的主要依据；该病毒的分类地位、地理分布、寄主范围和症状、传播途径、血清学特性及基因组特征等参见附录Ａ。３仪器设备、用具及试剂３．１仪器设备３．１．１酶标检测仪。３．１．２ＰＣＲ扩增仪。３．１．３电泳仪。３．１．４台式高速冷冻离心机。３．１．５凝胶成像系统。３．１．６电子分析天平。３．２用具３．２．１移液器（０．１μＬ～２μＬ，２μＬ～１０μＬ，１０μＬ～１００μＬ，１００μＬ～１０００μＬ）。３．２．２研钵。３．２．３０．２ｍＬ、０．５ｍＬ、１．５ｍＬ离心管。３．２．４酶联板。３．３犈犔犐犛犃检测试剂３．３．１包被缓冲液１０００犿犔（狆犎９．６）碳酸钠（Ｎａ２ＣＯ３）１．５９ｇ碳酸氢钠（ＮａＨＣＯ３）２．９３ｇ叠氮化钠（ＮａＮ３）０．２ｇ溶于１０００ｍＬ蒸馏水中，溶液的ｐＨ为９．６，不需要调ｐＨ值。３．３．２犘犅犛缓冲液１０００犿犔（狆犎７．２～７．４）氯化钠（ＮａＣｌ）８ｇ磷酸二氢钾（ＫＨ２ＰＯ４）０．２ｇ磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）２．９ｇ氯化钾（ＫＣｌ）０．２ｇ叠氮化钠（ＮａＮ３）０．２ｇ用无菌水溶解并定容至１０００ｍＬ。３．３．３样品抽提缓冲液１０００犿犔二乙基碳酰二胺（ＤＩＥＣＡ）２...
