中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４６２—２０１０棉花曲叶病毒检疫鉴定方法犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犮狅狋狋狅狀犾犲犪犳犮狌狉犾犅犲犵狅犿狅狏犻狉狌狊２０１００１１０发布２０１００７１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前言本标准的附录Ａ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国新疆出入境检验检疫局、浙江大学、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：张祥林、周雪平、朱水芳、王翀、吴卫、余永杰。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２４６２—２０１０食品伙伴网http://www.foodmate.net棉花曲叶病毒检疫鉴定方法１范围本标准规定了棉花曲叶病毒（ＣｏｔｔｏｎｌｅａｆｃｕｒｌＢｅｇｏｍｏｖｉｒｕｓ，简称ＣＬＣｕＶ）的检疫鉴定方法。本标准适用于可能带有棉花曲叶病毒的活体寄主植物的检疫鉴定。２原理棉花曲叶病毒的分类地位属于双生病毒科（Ｇｅｍｉｎｉｖｉｒｉｄａｅ）、菜豆金色花叶病毒属（Ｂｅｇｏｍｏｖｉｒｕｓ）。该病毒的生物学特性、血清学特性和分子生物学特征是制定本标准的主要依据（参见附录Ａ）。３仪器设备和用具３．１仪器设备电子天平（感量１／１０００ｇ）、超净工作台、高速冷冻离心机、小型低速离心机、ｐＨ计、恒温水浴锅、微量榨汁机、超低温冰箱、高压灭菌器、酶标仪、ＰＣＲ仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像分析仪等。３．２用具研钵、培养皿、可调式微量移液器（２μＬ、１０μＬ、２０μＬ、１００μＬ、２００μＬ、１０００μＬ）及相应的移液器头、９６孔酶联反应板、离心管（１．５ｍＬ、１０ｍＬ）、ＰＣＲ管（０．２ｍＬ）、量筒、烧杯、镊子。４试剂、缓冲液及溶液４．１１０×犘犅犛犜缓冲液氯化钾（ＫＣｌ）２ｇ、氯化钠（ＮａＣｌ）８０ｇ、磷酸二氢钾（ＫＨ２ＰＯ４）２ｇ、磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）１１．５ｇ、吐温２０（Ｔｗｅｅｎ２０）５ｍＬ，用浓盐酸（ＨＣｌ）调节ｐＨ至７．４，加蒸馏水定容至１０００ｍＬ，４℃条件下贮存。４．２样品提取缓冲液亚硫酸钠（Ｎａ２ＳＯ３）１．３ｇ、聚乙烯基吡咯烷酮（ＭＷ２４０００～４００００，ＰＶＰ）２０ｇ、叠氮钠（ＮａＮ３）０．２ｇ、吐温２０（Ｔｗｅｅｎ２０）２０ｍＬ溶解于８００ｍＬ１×ＰＢＳＴ中，用盐酸调节ｐＨ至７．４，加１×ＰＢＳＴ定容至１０００ｍＬ，４℃条件下贮...
