SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1376.2-2004牛传染性胸膜肺炎补体结合试验方法Methodofcomplementfixationtestforcontagiousbovinepleuropneumonia2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和匡国家质量监督检验检疫总肩SN/T1376.2-2004月q胃本标准的附录A、附录B是规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国四川出人境检验检疫局。本标准主要起草人:李玉冰、严玉宝、曹宗君、胡娟、马勇。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。SN/T1376.2-2004牛传染性胸膜肺炎补体结合试验方法范围本标准规定了牛传染性胸膜肺炎补体结合试验方法。本标准适用于牛传染性胸膜肺炎的血清学诊断。2试剂和材料2.1材料2.1.1玻璃试管。2.1.296孔血凝板。2.1.3可调式加样器。2.1.4试管架;2,1.5普通离心机、96孔板离心机。2.1.6水浴锅。2.1.7普通冰箱、普通冰柜。2.18微量振荡仪。2.2试剂2.2.1稀释液:灭菌巴比妥缓冲液(简称VB液)见附录A,2.2.2牛传染性胸膜肺炎补体结合试验抗原:由世界动物卫生组织(简称OIE)牛传染性胸膜肺炎参考实验室提供，使用时按说明书使用。2.2.3牛传染性胸膜肺炎补体结合试验标准阴性血清、标准阳性血清:由OIE牛传染性胸膜肺炎参考实验室提供。使用前做1，10倍稀释，56℃水浴灭活30min,2.2.4溶血素。2.2.5补体。2.2.660a绵羊红细胞悬浮液:见附录B,2.2.7被检血清:按常规方法采集、分离、运输和保存。使用前做1，功倍稀释,S6℃水浴灭活30mina预备试验3，1溶血素效价的测定3.1.11，20补体的配制0.5ML补体加人9.5mLVB液稀释成1:20补体置冰浴中，待用。3.1.21，100的溶血素的配制取溶血素原液。.1mL，加人VB液9.9mL混匀制成1‘100倍稀释的溶血素。3.1.3不同稀释度的溶血素溶液的配制用1，100的溶血素，按表1用VB液稀释溶血素并混匀。SN/T1376.2-2004表1溶血紊稀释表单位为毫升试管号1}2345一}7}8一}稀释度1:10001:20001:30001:40001s50001:60001‘70001:80001‘90001100JVAA0.10.10.10.10.10.10.10.10.1va液0_91.92.93.94.95.96.97.99.93.1.4溶血素效价测定试验将试管架及各试管置于冰浴中，按表2中各成分的量依次加人试管中浴作用30min;将上述各试管2000r/min离心5min，观察结果。表2溶血素效价测定表，振荡混匀，然后置于37℃水单位为毫升试管号123456789溶血素对照补体对照红细胞对照溶血索稀释度1:10001:20001‘30001:40001:50001:60001-70001.80001e90001‘100溶血素0.20.20.20.20...
