SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1447.1-2004猪传染性胸膜肺炎阻断酶联免疫吸附试验BlockingELISAforinfectiouspleuropneumoniaofswine2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和匡国家质量监督检验检疫总IFRSN/T1447.1-2004月U吕本标准的附录A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:周以凤、李树清、胡永强、李健、王巧全。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。SN/T1447.1-2004猪传染性胸膜肺炎阻断酶联免疫吸附试验范围本标准规定了阻断酶联免疫吸附试验检测猪传染性胸膜肺炎型特异性抗体的方法。本标准适用于猪传染性胸膜肺炎的检疫、流行病学调查、诊断和免疫监测2材料2.1试剂2.1.1磷酸氢二钠(Na_HP0,·12H20)。2.1.2磷酸二氢钾(KH2P0,),2.1.3氯化钠(NaCD.2.1.4柠檬酸(C,HaO,·Hz0),2.1.5邻苯二胺(OPD),2.1.630%过氧化氢(H202)。2.1.7硫酸(H,SO,),2.1.8吐温-20(Tween-20),2.1.9牛血清白蛋白(BSA).2.1.10包被液、稀释液、洗液、酶底物溶液和终止液的配制见附录A,注:所有化学试剂均为分析纯.2.2仪器设备2.2.196孔酶标板。2.2.2多通道、单通道可调移液器及加样头。2.2.3玻璃试管。2.2.4试管架。2.2.5天平(0.0001g),2.2.6低速离心机。2.2.7酸度计。2.2.8酶标仪。2.2.9普通冰箱。2.2.10恒温箱2.3标准试剂2.3.1猪传染性胸膜肺炎标准抗原。2.3.2猪抗传染性胸膜肺炎标准阳性血清。2.3.3标准猪阴性血清。2.3.4兔抗猪传染性胸膜肺炎标准阳性血清。2.3.5辣根过氧化物酶标记的猪抗兔IgG,采样被检动物无菌采血5mL，待血液凝固后，以2000r/min离心10min，分离血清，血清一20℃保存。1SN/T1447.1-2004操作方法4.1包被抗原将猪传染性胸膜肺炎抗原用包被液稀释成工作浓度，包被酶标板，每孔100hL，加盖后放置4℃冰箱过夜。4.2封闭次日取出酶标板，置37℃恒温箱或室温30min后，弃去包被液，每孔加200hL稀释液，37'C孵育Ih.4.3洗板取出酶标板弃去液体后，每孔加洗液300I,L，洗板，共三次，每次2min。最后一次倒置拍干。4.4加样被检血清用稀释液作1，4稀释，每份血清加2孔，每孔100IL。设立下列对照:猪抗传染性胸膜肺炎标准阳性血清(阳性对照)、标准猪阴性血清(阴性对照)、兔抗猪传染性胸膜肺炎标准阳性血清(兔抗APP对照)、空白对照。阳性、阴性血清对照同被检血清一样，用稀释液作1:4稀释，每个对照加2孔，每孔100pL。兔抗APP对照和空白对照同样加...
