SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1379.1-2004猪瘟单克隆抗体酶联免疫吸附试验Protocoloftheenzyme-linkedimmunosorbentassayusingmonoclonalantibodyforthedetectionofantibodiesagainstclassicalswinefevervirus2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布SN/T1379.1-2004月臼吕本标准的附录A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国广东出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人:许如苏、郭奕亮、肖德雄。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。SN/T1379.1-2004猪瘟单克隆抗体酶联免疫吸附试验范围本标准规定了单克隆抗体酶联免疫吸附试验(间接法)检测猪瘟抗体的方法。本标准适用于猪瘟的检疫、诊断和疫苗免疫监测。仪器设备2.5酶标板。可调移液器。恒温培养箱。电子天平:感量0.001g,酶标检测仪。，.乃乙勺J三且…朽‘今‘2，J夕﹂试荆31诊断试剂3.1.1猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原。3.1.2猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原.3.1.3标准阴性血清。3.1.4标准阳性血清。3.!.5酶标二抗(兔抗猪!gG辣根过氧化物酶结合物)。3.2被检血清:无溶血、无污染。3.3溶液3.3.1试验所需溶液包括:—包被液(pH9.6碳酸盐缓冲液);—磷酸缓冲盐水(PBS);—磷酸缓冲盐水一吐温(PBS-T)洗涤液;—稀释液(PBS-T-BS);—邻苯二胺(OPD)底物液:使用前配制;—终止液(2mot/LH,SO,).3.3.2溶液配制见附录Aa注:诊断试剂由中国兽药监察所生产。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果有其他等效产品，则可按其使用说明书使用操作方法4.1包被用包被液将猪瘟病毒(强毒或弱毒)单抗纯化酶联抗原作100倍稀释，每孔加人100川_，置湿盒于40C过夜。4.2洗板弃去孔内液体，用洗涤液洗板三次，每次3min-5面n，甩干孔内残液，于滤纸上拍打吸干。SN丫T1379.1-200443加被检血清和标准血清用稀释液将待检血清作400倍稀释，每孔加100I}L。同时将标准阴性、阳性血清分别作100倍稀释作对照，37℃培育1.5h--2h,4.4洗板重复4.2。4.5加酶标二抗用稀释液将兔抗猪坛G-辣根过氧化物酶结合物稀释至工作浓度，每孔加人100pL,37℃培育1.5h-2h.4.6洗板重复42。4.7加OPD底物溶液每孔加人底物溶液100[L，室温下避光反应5min-15min.4.8终止反应当标准阳性血清对照孔呈黄色，标准阴性血清对照孔无色或略微显色时，每孔加人50pL终止液终止反应，5min内测定光密度。4.9测定光密度以标准阴性血清对照孔作空白...
