SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1418-2004鸭病毒性肝炎I型病毒血清中和试验SerumneutralizationtestforduckvirushepatitistypeIvirus2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和匡国家质量监督检验检疫总婿SN/T1418-2004oil台本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国珠海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:陈琅、黄新民、徐海聂、杨素、潘文波、廖秀云。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。SN/T1418-2004鸭病毒性肝炎I型病毒血清中和试验范围本标准规定了鸭病毒性肝炎工型病毒血清中和试验操作方法.本标准适用于检测血清中的鸭病毒性肝炎工型病毒抗体。主要用于鸭病毒性肝炎的诊断及病原鉴定、免疫水平的监测和流行病学调查。2缩略语下列缩略语适用于本标准。BME:Eagle'sBasalMedium细胞基础盐培养基2.2CPE:细胞病变。23DEK:鸭胚肾细胞。2.4DEL:鸭胚肝细胞。2.5DHV一工:鸭病毒性肝炎工型病毒。2.6FCS:胎牛血清。2.7MEM:Eagle'sMinimalEssentialMedium细胞培养基。2日PFU:空斑形成单位。2.9TCID,::半数细胞培养感染量.原理病毒感染敏感的细胞单层后，可以在细胞单层上生长增殖，并能产生CPE，使感染细胞圆缩、坏死并形成空斑，血清中的特异性抗体能够抑制病毒在细胞单层上生长，血清抗体中和病毒的能力可以通过其阻止CPE产生的程度加以测定。本中和试验是应用固定病毒量稀释血清的方法，在DEL或DEK细胞单层上进行中和试验，用于鸭血清抗体的测定或病原的鉴定。4仪器设备4.2:.;4.5高压蒸气灭菌器。可调移液器。二氧化碳恒温培养箱。倒置显微镜。除菌过滤器。SN/T1418-20045材料准备5.1鸭病毒性肝炎1型病毒。5.2抗鸭病毒性肝炎工型病毒的阴、阳性血清，使用前均以56℃灭能30min后备用。5.3受检血清按常规方法采血并分离血清，使用前均以56℃灭能30min后备用。5.4溶液的配制:见附录A,5.5细胞培养板:选用无菌的孔径为5cm平底带盖塑料培养皿，或96孔平底带盖塑料培养板。5.6其他仪器:如剪刀、镊子、平皿、烧杯、三角瓶、刻度离心管、注射器、吸头等以112kPa高压灭菌30min,烘干后备用。5.7DE工_细胞单层的准备:参见第B.1章5.8DEK细胞悬液的准备:参见第B.2章。6血清中和空斑减数试验6.1病毒毒价测定及配备取DHV一工用维持液将病毒液作10倍系列稀释，每个稀释度接种三个培养皿，按7.2.4和7.2.5的方法进行试验。取每个稀释度的三个培养皿的空斑平...
