}+l\}中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1444-2004大鼠流行性出血热间接免疫荧光试验Indirectimmunofluorescentantibodytechniqueforepidemichemorrhagicfeverofrats2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和匡国家质量监督检验检疫总局SN/T1444-2004目9吕本标准的附录A是规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:胡永强、李树清、王巧全、徐红。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。SN/T1444-2004大鼠流行性出血热间接免疫荧光试验1范围本标准规定了间接免疫荧光试验检测大鼠流行性出血热抗体的方法本标准适用于大鼠流行性出血热的检疫、流行病学调查和免疫监测。2材料2.1试剂2.1.1磷酸氢二钠(Na>HP0,·12H20),2.1.2磷酸二氢钾(KH2P04).2.1.3氯化钠(NaCl)。2.1.4伊文斯蓝。2.1.5甘油。2.1.60.01mot/LpH7.4磷酸缓冲液、0.01%-0.0200伊文斯蓝液和90%甘油缓冲盐水的配制见附录A。注;所有化学试剂均为分析纯2.2仪器设备2.2.1单通道可调移液器及加样头。’2.2.2染色缸。2.2.3保湿盒。2.2.4盖玻片。2.2.5恒温箱。2.2.6低温冰箱。2.2.7酸度计2.2.8荧光显微镜。2.3标准试剂2.3.1多孔流行性出血热病毒抗原片(-20℃保存)。2.3.2流行性出血热阳性血清。2.3.3流行性出血热阴性血清。2.3.4异硫氰酸荧光黄(FITC)标记的兔抗大鼠坛G荧光抗体。3采样被检大鼠无菌采血0.5mL-1.0mL，待血液凝固后，以2000r/min离心10min，分离血清。血清经56'C30min灭活后，置一20℃保存备用。4操作方法4.1准备抗原片从低温冰箱中取出流行性出血热病毒细胞抗原片，冷风吹干。SN/T1444-20044.2稀释血清将被检、阳性及阴性血清1，20稀释。分别取。1mL加人0.0lmol/LpH7.4磷酸缓冲液1.9m工一，混匀。4.3加样抗原片编号后，取1:20稀释的被检血清10pL加人病毒抗原片孔内，每张抗原片均设阴性血清、阳性血清对照及标本自发荧光对照。阴性血清、阳性血清也与被检血清同样取10pL加人病毒抗原片孔内，标本自发荧光对照在对照孔内加人。.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液10pLa4.4反应抗原片置湿盒内，370C恒温孵育30min,4.5洗玻片取出抗原片，用0.01mol/I.pH7.4磷酸缓冲液(中间更换一次)振荡洗涤三次，每次5min。再用蒸馏水漂洗一次，冷风吹干。4.6稀释荧光抗体用0.01%-0.02%伊文斯蓝液稀释FITC标记的兔抗大鼠坛G荧光抗体至工作浓度。4.7加荧光抗体抗原片中每孔加人10川工作浓度的荧光抗体。48反...
