SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1151.2-2002对虾白斑病毒(wsv)聚合酶链式反应(PCR)检测方法Testmethodofpolymerasechainreaction(PCR)forwhitespotvirus(WSV)2002一11一25发布2003一05一01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布SN/T1151.2-2002前言本标准是在参考国际上通用的检测规程和总结我国在这一领域的实践经验的基础上制定的。本标准的附录A是资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人:刘药、史秀杰、高隆英、江育林。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。SN/T1151.2-2002对虾白斑病毒(WSV)聚合酶链式反应(PCR)检测方法范围本标准规定了用聚合酶链式反应技术(PCR)检测对虾白斑病毒(WSV)的方法。本标准适用于对虾白斑病毒的鉴定，适用于本病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO3696:1987)试剂和材料3.1水应符合GB/T6682-1992中一级水的规格。用于PCR(包括核酸抽提)时所用的水要用DEPC处理。3.2Taq酶一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。3.3dNTP(含dCTP,dGTP,dATP,dTP各10mmol/L)引物浓度为40pmol/L。有两对引物，使用时浓度皆为401smol/L，其序列分别为:146F1;5'-ACTACTAACTTCAGCCTATCTAG3';146R1:5'-TAATGCGGGTGTAATGTTCTTACCA-3'，扩增1447饰的片段;146F2:5'-GTAACTGCCCCTTCCATCTCCA-3';146R2:5'-TACGGCAGCTGCTGCACCTTGT-3'，扩增上述片段中的941by片段。3.4无水乙醇分析纯，使用前预冷到一200C.3_5矿物油无DNA酶和RNA酶。仪器和设备4.1PCR扩增仪4.2电泳仪4.3微量移液器和吸头4.4紫外观察灯4.5恒温培养箱4.6普通冰箱和低温冰箱SN/T1151.2-20024.7电动匀浆器4.8离心机和离心管4.9剪刀4.10摄子白斑病毒DNA的鉴定5，1采样取活虾和活虾的头部，立即处理或放在95%酒精中(可在常温下保存30d,样品处理前必须让酒精完拿挥发。取50mg-100mg的鳃丝(或上皮、肝胰腺和肠)，放在1.5mL的离心管中。5.2样品处理在15℃下，首先加人150pLCTAB溶液(见附录A.1)，用小剪刀剪碎，后用均浆器将样品均浆...
