SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1171.1-2003山羊关节炎一脑炎抗体检测方法酶联免疫吸附试验Detectionofantibodiesagainstcaprinearthritis-encephalitisvirus-Protocolofenzyme-linkedimmunosorbentassay2003-03-17发布2003-09-01实施中华人民共和匡国家质量监督检验检疫总婿SN/T1171.1-2003月U吕本标准根据OIE/chapter2.4.4((诊断试验和疫苗标准手册》起草.本标准的附录A、附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、国家质量监督检验检疫总局标准法规研究中心。本标准主要起草人:杨宝华、崔路、曾宪生、张艳。本标准是首次发布的检验检疫行业标准。SN/T1171.1-2003山羊关节炎一脑炎抗体检测方法酶联免疫吸附试验范围本标准规定了应用酶联免疫吸附试验(ELISA)批量检测山羊血清中抗山羊关节炎一脑炎病毒抗体的方法。本标准适用于山羊关节炎一脑炎的流行病学调查、诊断、检疫和疫情监测。2试验原理酶联免疫吸附试验(ELISA)的基本原理是将酶分子与抗体或抗体共价结合，此种结合不改变抗体的免疫反应活性和酶的生化活性，酶标记抗体可与吸附于固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合，随后加人的底物可在酶分子的作用下呈现颜色反应，因而可借颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与样品中相应抗体或抗原的量呈正比，通过酶标仪可检测颜色反应的光密度值。本标准的反应原理就是将CAE病毒抗原包被在96孔聚乙烯微量板上，接着加人按一定比例稀释的待检血清，待反应一定时间后，加人酶标记的抗山羊免疫球蛋白抗体，反应完成后，加人底物显色并检测反应结果。3试验准备3.1仪器二氧化碳培养箱、酶标仪、倒置显微镜、超速离心机、高速离心机、细胞培养瓶、多孔道微量加样器、96孑L聚乙烯微量板等。3.2试剂3.2.1THE缓冲液0.01mot/LTris-HCI,pH7.4,0.01mol/L氯化钠，0.001mol/LEDTA,3.2.2洗涤液含0.05%Tween-20的双蒸水。3.2.3pH7.2PBS溶液氯化钠8.00g,氯化钾。.20g,磷酸氢二钠1.15g,磷酸二氢钾。20g，水溶至1000ml。3.2.4高盐稀释液含0.050aTween-20,10%小牛血清的0.5mol/L氯化钠溶液。3.3标准抗原与血清制剂CAE种毒、标准抗原、阳性血清、阴性血清由指定单位提供。抗山羊IgG过氧化物酶结合物按市售说明书使用。试验程序4.1ELISA操作程序4.1.1于96孔聚乙烯微量板中加人用PBS(pH7.2)稀释的50I}L最适稀释度的CAEV抗原，封口后置40C48h，用洗涤液洗板二...
