ICS11．220B41囝图中华人民共$-n国国家标准GB／T27531--2011病毒性脑病和视网膜病病原逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)检测方法Protocolofreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR)forthepathogenofviralencephalopathyandretinopathy2011—11-21发布2012—03—01实施宰瞀髁鬻瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会仪1”刖昂GB／T27531—2011本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC／TC181)归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本标准主要起草人：刘荭、卢体康、何俊强、史秀杰、郑晓聪、贾鹏、叶奕优、杨锦舜。1范围病毒性脑病和视网膜病病原逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)检测方法GB／T27531—2011本标准规定了病毒性脑病和视网膜病(viralencephal。pathyandretinopathy，VER)病原分离和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法。本标准适用于VER病原的流行病学调查、诊断、检疫和监测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法GB／T18088出入境动物检疫采样3缩略语下列缩略语适用于本文件。CPE：细胞病变(cytopathiceffect)CTAB：十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyitrimethyammoniumbromide)DEPC：焦碳酸乙二酯(diethypyrocarbonate)EB：溴化乙锭(ethidiumbromide)EDTA：乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)HEPES：羟乙基呱嗪乙硫磺酸[4一(2一hydroxyerhyl)piperazine一1一erhanesulfonicacid]RNA：核糖核酸(ribonueleicacid)RNasin：核酸酶抑制剂(ribonucleaseinhibitor)VER：病毒性脑病和视网膜病(viralenc印halopathyandretinopathy)4试剂和材料水：符合GB／T6682中一级水的规格，用DEPC处理以除掉RNA酶。VERV病毒参考株。胰酶一EDTA混合消化液(见附录A中A．1)。L-15培养液(见附录A中A．2)。SSN一1细胞系：用L_15培养液25℃培养。E-11细胞系：用L-15培养液25℃培养。AMV逆转录酶：20u／pL，一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。RNasin：20u／pL，一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。胰蛋白酶。，23456789444444444GB／T27531—20114．10Taq酶：一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。4．11dNTP：含dCTP、dGTP、dATP、...
