中华人民共和国国家标准GB15193.8一94小鼠塞丸染色体畸变试验Chromosomeaberrationtestinmicetesticlecells，主题内容与适用范围本标准规定了小鼠辜丸染色体畸变试验的基本技术要求。本标准适用于检测环境有害物质对整体哺乳动物肇丸生殖细胞染色体的损伤。2引用标准GB15193.6骨髓细胞染色体畸变试验3原理不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过DNA复制期，故在前细线期处理。第12^14d采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。4仪器和试剂全部试剂除注明外，均为分析纯，试验用水为蒸馏水。4.1实验室常用设备。4.21%柠檬酸三钠(分析纯):取1g柠檬酸三钠，加蒸馏水至100mL,4.360%冰乙酸(分析纯):取60mL冰乙酸，加蒸馏水至100mL。均宜新鲜配制。5实验步骤5.1动物选用健康成年雄性小鼠，体重2530g，每组5只.5.2剂量分组设阴性(溶剂)对照组，阳性对照组及三个受试物剂量组。阳性物可用丝裂霉素C(1.5^'2mg/kg,腹腔注射，一次)或环磷酞胺(40mg/kg,腹腔注射，每天一次，连续5d)。阳性对照组在同一个实验室同一品系动物仅做一次即可，如调换操作人员，应重新再做。受试物的三个剂量组可根据急性经口LD,o，选用可使受试动物出现轻度中毒症状、体重略有下降、不引起动物死亡的剂量为高剂量，以其1/2,1/4LD,。为中、低剂量。5.3给受试物方式灌胃给予受试物，每夭一次，连续5d,5.4受试物配制一般用蒸馏水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食油、医用淀粉、竣甲基纤维素配成悬浮液。5.5取样时间中华人民共和国卫生部1994一08一10批准1994一08一10实施GB15193.8一94各组均于第一次给予受试物后的第12.14d将受试动物处死制片。5.6操作5.6.1动物处死前6d腹腔注射秋水仙素4-6mg/kg体重(按。.1-0.2mL/10g体重给受试物)。秋水仙素宜当天新鲜配制。5.6.2以颈椎脱臼法处死小鼠，取出两侧翠丸，去净脂肪，于低渗液中洗去毛和血污，放入盛有适量1%柠檬酸三钠或。.4%氯化钾溶液的小平皿中。5.6.3以眼科小镊子撕开被膜，轻轻地分离开曲细精管，室温下低渗，低渗时间视具体条件而定(一般为2040min为宜)。5.6.4仔细吸尽低渗液，加固定液(甲醇:冰乙酸=3:1)10mL，固定20mina5-6.5吸尽固定液，加60%冰乙酸1-2mL，待大部分曲细精管软化完后，立即加人倍量的固定液，打匀、移入离心管，以1000r/min离心10min,5.6.6弃去大部分上清液，留下约0.5^-1.0mL，充分打匀制成细胞混悬液，将细胞混悬液均匀地滴于冰水玻片上...
