中华人民共和国国家标准GB15193-10一94非程序性DNA合成试验UnscheduledDNAsynthesistest1主题内容与适用范围本标准规定了非程序性DNA合成试验的基本技术要求。本标准适用于预测环境有害物质的致癌性/诱变性，用这种短期筛选方法可以检测出一些短期体外试验法所不能检出的诱变剂/致癌剂。2引用标准GB15工93.魂鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验3原理正常情况下，于细胞有丝分裂周期中，仅S期是DNA合成期。当DNA受损伤时，损伤修复的DNA合成主要在其他细胞周期，称程序外DNA合成，即UDS,因此发现UDS增高，即表明DNA发生过损伤在体外培养细胞中，用UDS的测量来显示DNA修复合成的主要关键在于如何鉴别很高水平的半保留DNA复制和水平较低(充其量只有半保留DNA复制的500)的UDS,这可以用同步培养将细胞阻断于G，期并用药物<常用经基脉)抑制残留的半保留DNA复制后显示。同步培养可用缺乏必需氨基酸精氨酸的培养基(ADM)使DNA合成的始动受阻而使细胞同步于G,期.在这些半保留DNA合成明显抑制和阻断了的细胞中，UDS即可用'H-胸腺喃吮核昔的掺入增加显示。它可用放射自显影或液体闪烁计数法进行测蚤.3试荆的配制和细胞培养器皿的准备3.1试剂全部试剂除注明外，均为分析纯，试验用水为双燕水。3.1.1细胞增殖用培养基,Eagle氏最低要求培养基(MinimalEssentialMedium,简称EMEM)85份，小牛血清15份，加入青霉素、链霉素贮存液1份，使青霉素、链霉素的最终浓度分别为100单位及100pg/mL.EMEM培养基可选用各种商品供应之粉末培养基按生产厂商提供资料配制并除菌a4℃冰箱贮存。3.1.2同步用培养基:不含精氨酸之Eagle氏MEM培养基(ADM)98份，小牛血清2份，青霉素、链霉素浓度同细胞增殖用培养基。3.1.3Hanks平衡盐溶液(HBSS)贮液A:将氯化钠160g,氯化钾8g，硫酸镁(MgSO,·7H}0)2g及氯化镁(Mgcl,，6H,0)2g溶于800mL双蒸水(50^-600C)中。另取无水氯化钙2.8g溶于100all双蒸水中。将上述两溶液混合后，加水至1000ml-，加入三氯甲烷2mL，保存于4℃中。-如‘间一一一‘一一一目一一一，一一-.一中华人民共和国卫生部1994一08-10批准1994一08一10实施GB1519310一94贮液B:将磷酸氢二钠(Na,HPO,·12H20)3.049(或Na2HP0,·2H201.2g),磷酸二氢钾(KHIP0,·2H20)1.2g(或KH2POa0.95g),葡萄糖20g溶解于800mL双蒸水中，加入100mLO.4环酚红溶液(取酚红1g,溶于3ml,lmol/L氢氧化钠中，待完全溶解后，加入双蒸水中至250mL)，加水至1000mL，加入三氯甲烷2mL，保存于4℃中。贮液C:1.4%碳酸氢钠以...
