ICS65.020.01B05备案号：56324-2017DB22吉林省地方标准DB22/T2623.3—2017黑木耳菌种区别性及真实性鉴定第3部分：SRAP法VerificationofdistinctnessandgenuinenessforBlackwoodearspawnPart3:SRAP2017-06-12发布2017-08-12实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2623.3—2017I前言《黑木耳菌种区别性及真实性鉴定》分为以下3个部分：——DB22/T2623.1黑木耳菌种区别性及真实性鉴定第1部分对峙培养法——DB22/T2623.2黑木耳菌种区别性及真实性鉴定第2部分酯酶同工酶法——DB22/T2623.3黑木耳菌种区别性及真实性鉴定第3部分SRAP法本部分为第3部分：SRAP法。本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2015给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林农业大学、吉林省海外农业投资开发集团有限公司。本标准主要起草人：姚方杰、张友民、方明、陈影、鲁丽鑫、王鹏、姚允武、于娅、刘宏宇、李丹、王晓娥、陈艳秋、刘迪、张伟彤、孔祥会、马晓旭、张媛媛、李玉。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2623.3—20171黑木耳菌种区别性及真实性鉴定第3部分：SRAP法1范围本标准规定了黑木耳菌种真实性SRAP法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品、试验步骤、试验数据处理。本标准适用于黑木耳菌种真实性鉴定。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1引物primer适用于黑木耳菌株真实性鉴定的一定长度和顺序的寡核苷酸链。2.2PCR空白对照PCRcontrolcheck以无菌水作为模板进行PCR反应，以验证PCR反应过程中是否发生污染。2.3阴性提取对照negativecontrol水作为材料提取DNA，以证明黑木耳DNA在制备过程中是否发生污染。3原理对黑木耳菌种的ORFs区域中内含子、启动子进行特异扩增，检测和比较该序列长度多态性。通过对PCR产物的检测和比较，识别黑木耳菌种基因组DNA的多态片段，鉴定菌种的真实性。4试剂和材料4.1培养基：见附录A。4.2四种脱氧核糖核苷酸(dATP，dCTP，dGTP，dTTP)混合溶液。4.3TaqDNA聚合酶。4.4核酸染料。4.5DNA分子量标记。4.6引物：参见附录C。4.7剥离硅烷。4.8亲和硅烷。4.91mol/LTris-HCl(pH8.0)：见附录B.1。4.100.5mol/L乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-2Na)溶液：见附录B.2。4.11CTAB提取缓冲液：见附录B.3。本标准仅供内部...
