器111.220中华人民共和国农业行业标准NY/T572-2002兔出血病血凝和血凝抑制试验方法Haemagglutinationandhaemagglutinationinhibitiontestsforrabbithaemorrhagicdisease2002一08一27发布2002一12一01实施中华人民共和国农业部发布567NY/'e572-2002前言兔出血病(曾称兔病毒性出血症)，是兔的毁灭性疫病，世界动物卫生组织{WorldOrganizationforAnimalhealth(英),OfficeInternationaldesEpizooties(法),OIE]和我国分别将之列为f3类和二类动物疫病。本标准采用了(AE《诊断试验和疫苗标准手册)>(2000版)(ManualofStandardsforDiagnosticrestsandVaccines)第2.8.3章规定的常规诊断方法(该方法最早系由我国建立)，与该章的规定相比，本标准特点:根据本国实践经验，将其具体化，成为操作程序。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由个国动物检疫标准化技术委员会归no本标准起q.单位:江苏省农业科学院畜牧兽医研究所本标准主要起草人:王启明、董亚芳。-20025720NY/T兔出血病血凝和血凝抑制试验方法1范围本标准规定了兔出血病血凝和血凝抑制试验的技术要求。本标准适用于兔出血病的诊断和流行病学调查。2血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)2.1材料和试荆2.1.1可疑兔及正常兔肝悬液的制备:分别将肝脏剪碎、按1:离心30min，取上清液做血凝试验2.1.2生理盐水2.1.3阿氏液(Alsever}s)成分:葡萄糖(化学纯)氯化钠柠檬酸钠(Na,C,H,;O,·2H())(化学纯)柠檬酸(H〔’H;(),·H())(化学纯)A馏水制法:将以1_药品混合加热溶解、过滤.65.94kPa15min1。加入牛理盐水后匀浆再以4r/min20"K门.12K比8!'().055k100ml火菌，4交保存备用2.1.41%人‘()"NY91*细胞悬液的制备:取新鲜人‘'()"}'I红细胞于阿氏液中保存(置4Y'可保存一周)。用时取人‘，()”酬红细胞以2。倍量生理盐水混匀洗涤红细胞，2000r/ntin离心15min，弃仁清，重复洗涤4次.最后一次离心前，计算红细胞悬液体积(在离心后扣减弃去L清液的体积.即为红细胞的体积)。洗涤后的红细胞用生理盐水配成1%悬液，置4(备用。2.1.5阳性血清。2.2微f血凝试验2.2.1在96孔VI1微量滴定板上，从第2孔至第11孔，每孔加人生理盐水(0.025ml。2.2.2然后在第1,2孔加人1:10的可疑兔肝悬液。025ml.2.2.3从第2孔开始，充分混合后用。.025ml移液管作等量倍比稀样至第10孔，最后1孔弃去0.025ml。2.2.4第11孔是生理盐水对照，第12孔加1:1。的正常兔ff悬液对照2.2.5每孔各加1写人’..Cl.l型红细胞0.025m工J，立即在微型振荡器卜摇匀.置4C冰箱45min，待...
