ICS11.220B41中华人民共和国农业行业标准NY/T548一2002猪传染性胃肠炎诊断技术Diagnostictechniquesfortransmissiblegastroenteritis2002一08一27发布2002门2一01实施中华人民共和国农业部发布NY/T548-2002月U吕猪传染性胃肠炎(transmissiblegastroenteritis，简称TGE)是由冠状病毒属中的猪传染性胃肠炎病毒导致的高度传染性猪胃肠道病以呕吐、水样腹泻为临床特征，不同年龄的猪都易感，但一周龄以内的仔猪死亡率可达100写，随着年龄的增大，死亡率逐渐下降。大多数养猪国家都有本病发生，给养猪业造成巨大的经济损失世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE」将TGE定为B类传染病，是我国法定检疫的疫病本标准主要参考了世界动物卫生组织《诊断试验和疫苗标准手册))(2000)及国内外发表的同类研究试验报告。本标准的附录A为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标准主要起草人:马思奇、王明、冯力、侮有恩。NY/T548-2002猪传染性胃肠炎诊断技术1范围本标准规定了猪传染性胃肠炎的病毒分离鉴定与检测病毒抗原的直接免疫荧光法、双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)及检测血清抗体的中和试验、间接ELISA试验技术。本标准适用于对猪传染性胃肠炎的临床诊断、产地检疫及流行病学调查等。2材料准备2.1器材倒置显微镜、冷冻离心机、微孔滤膜、滤器、细胞培养瓶、盖玻片、温箱、荧光显微镜、冰冻切片机、载玻片、滴管、定量加液器、微量吸液器及配套吸头、96孔或40孔聚乙烯微量反应板、单通道,8通道微量吸液器及配套吸头、二氧化碳培养箱、微量振荡器及小培养瓶、酶标测试仪等。2.2溶液的配制0.02mol/I.pH7.2磷酸盐缓冲液、细胞培养液、病毒培养液,HEPES液、。.I0o伊文斯蓝原液、磷酸盐缓冲甘油、洗液、包被稀释液、样品稀释液、酶标抗体稀释液、底物溶液、终止液，配制方法见附录A2.3试剂荧光抗体(FA)，猪抗TGE-1gG及猪抗TGE-IgG-HRP，病毒抗原和标准阴、阳性血清，抗原和酶标抗体2.4细胞仔猪肾原代细胞或PKs,ST细胞系。细胞培养液，配制方法见附录A,3病毒分离鉴定3.1病毒分离3.1.1病料采集采病仔猪空肠两端扎住，取其内容物及小肠用于分离病毒，样品冷冻保存。3.1.2病料处理将采集的小段空肠剪碎及肠内容物用含青霉素10000IU,链霉素10000pg/mL的磷酸盐缓冲液(PBS)液(见第A.1章)制成5倍悬液，在...
