ICS11．220B41圆目中华人民共$-n国国家标准GB／T27517—2011鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT—PCR方法AmultiplexRT_PCRmethodtodifferentiatethehighlypathogenicandclassicalporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus2011-11—21发布2012-03-01实施宰瞀髁鬻瓣警糌瞥霎发布中国国家标准化管理委员会“⋯刖昌GB／T27517—20¨本标准按照GB／T1．12009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(sAc／Tc181)归口。本标准起草单位：河南省动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：吴志明、闫若潜、张志凌、张健、荆汝顶、刘光辉、赵明军、曹杰伟、钱勇、程俊贞、赵雪丽、张盼。1范围鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT—PCR方法GB／T27517—2011本标准规定了检测以基因组非结构蛋白Nsp2编码区缺失30个氨基酸为特征的猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株与非缺失30个氨基酸的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株复合RT—PCR鉴别诊断方法。本标准适用于疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪血清及临床病料等样品中的病毒核酸检测。2试剂和仪器设备除另有规定外，所用生化试剂均为分析纯。提取RNA所用试剂均应使用无RNA酶的容器进行分装。2．1试剂2．1．1拭子悬液(见附录A)，组织悬液(见附录A)，以上试剂常温保存。2．1．2阿氏液(见附录A)，裂解液(Triz01)，1×TAE核酸电泳缓冲液(见附录A)，氯仿，0．Olmol／L(pH7．2)的PBS(见附录A)，DEPC处理水(见附录A)，以上试剂4℃保存。2．1．3异丙醇，75％乙醇，DNA分子量标准，6×电泳上样缓冲液，以上试剂一20℃保存。2．1．4阳性对照、阴性对照(见附录A)。2．1．5复合RT-PCR扩增用上、下游引物序列参见附录B。2．1．6鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT—PCR反应体系组成、说明及使用注意事项参见附录c。2．2仪器设备PCR扩增仪，高速冷冻离心机(离心力在120009以上)，核酸电泳仪和水平电泳槽，恒温水浴锅，2℃～8℃冰箱，--20℃冰箱，单道微量移液器(o．5弘L～10pL；2p．L～20pL；20肛L～200pL；100pL～1000pL)，组织匀浆器或研钵，凝胶成像系统(或紫外透射仪)，真空干燥器(非必备)。3样品的采集、处理、存放及运输3．1样品采集及处理过程的注意事项采样过程中样本不得交叉污染，采样及样品处理过程中应戴一次性手套、口罩、帽子。3．2样品的采集及处理3．2．1拭子样品3．2．1．1鼻腔拭子：采样...
