ICS65．020．01B16圆雷中华人民共和国国家标准GB／T28065--2011地中海实蝇生物芯片检测方法BiochipdetectionofCeratitiscapitata(Wiedemann)2011-12-30发布2012-06-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局借龠中国国家标准化管理委员会厘111刖置GB／T28065--2011本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局，本元正阳基因有限公司、深圳市检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：余道坚、李建光、任鲁风、徐浪、周琦、章桂明、陈枝楠、汪万春、康林、仲建忠、向才玉。1范围地中海实蝇生物芯片检测方法GB／T28065--2011本标准确定了地中海实蝇Ceratitiscapitata(Wiedemann)(双翅目Diptera实蝇科Tephritidae)的生物芯片制备、检测和结果判定方法。本标准适用于相关贸易和有害生物监测中地中海实蝇卵、幼虫、蛹的鉴定和成虫的鉴定或复核。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。sN／T2039地中海实蝇检疫鉴定方法PCR法3缩略语SN／T2039界定的缩略语适用于本文件。4方法原理选择实蝇科昆虫线粒体DNACOI基因核苷酸片段为分子标记探针，将探针按预先设置的排列固定于特定的固相支持载体(如：醛基化基片)的表面形成微点阵，利用反向固相杂交技术，用Cy3标记脱氧胞苷三磷酸(Cy3一dCTP)荧光标记的样品分子与微点阵上的探针杂交，实现多个分子之间的杂交反应，并通过芯片扫描信号的判读来检测样品中特定基因片段的存在，最后确定是否为地中海实蝇。5仪器和用具PCR扩增仪、芯片点样仪、芯片扫描仪、离心机、水浴锅、涡旋器、冰箱、电子天平、烘箱、磁力搅拌器。醛基化基片、多孔板、芯片盖片、芯片分隔围栏、芯片粘贴工具、湿盒、杂交盒、计时器、磁柱、芯片架、2L烧杯、15mL离心管、量筒、移液器等。6试剂6．1昆虫基因组DNA提取试剂盒。6．2DNA快速纯化／回收试剂盒。6．3去离子水。6．450％二甲基亚砜(DMSO)。6．50．2％十二烷基磺酸钠(SDS)。6．80．2％硼氢化钠。GB／T28065--20116．710XSSPE(20XSSPE：3mol／L氯化钠，200mmol／L磷酸二氢钠，25mmol／LEDTA，pH7．4)。6．80．3×SSC、0．06XSSC(20XSSC：3mol／L氯化钠，300mmol／L柠檬酸钠)。6．910XP...
