ICS备案号：辽宁省地方标准DB21DB21/T1749.3—2009黄瓜绿斑驳花叶病毒检验检测技术规程2009-10-23发布2009-11-23实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/T1749.3—2009前言本标准附录A、附录B、附录C、附录D、附录E为规范性附录。本标准由辽宁省农村经济委员会提出并归口。本标准起草单位：辽宁省植物保护站。本标准主要起草人：蔡明、宋雅坤、吴元华、李明福、江冬、李眷、李维根。IDB21/T1749.3—2009黄瓜绿斑驳花叶病毒检验检测技术规程1范围本标准规定了黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumbergreenmottlemosaicvirus，CGMMV）的检验检测与鉴定方法。本标准适用于全省各地开展黄瓜绿斑驳花叶病毒的检验检测工作。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1检验inspection对植物、植物产品或其他限定物进行官方的直观检查以确定是否存在有害生物和/或是否符合植物检疫法规。2.2检测detection为确定是否存在有害生物或为鉴定有害生物而进行的除肉眼检查以外的官方检查。2.3鉴定identification对可疑的有害生物是否与已知物种同一的鉴别过程。2.4发生happen官方报道在一个地区存在着土生或传入的有害生物，和/或官方未报道在一个地区存在的有害生物已经被根除。3原理黄瓜绿斑驳花叶病毒属烟草花叶病毒属。其病原形态特征见附录A，其寄主范围、地理分布、生物学特性、危害症状和传播途径见附录B，其血清学检测技术，应用双抗体夹心酶联免疫吸附法技术（ELISA）测定和分子生物学（PCR）测定，具体检测方法见附录C、附录D。4材料、仪器、用具及药品4.1材料葫芦科作物种子、叶片和果实。4.2仪器、用具电子显微镜、台式离心机、分光光度计、RT-PCR仪、冰箱、酶联板、酶联读数仪、微量加样器、洗瓶、载玻片、玻棒、研钵、微量离心管、培养皿、打孔器、滴管、吸管、量筒、三角瓶、水浴锅、毛细管、针头、电泳仪、水平电泳槽、胶手套、剪刀、镊子、自封袋、油性笔、标签、记录本等。4.3药品1DB21/T1749.3—2009专化性抗体免疫球蛋白1gG(浓度约为1mg/mL)、酶标记羊抗兔抗体球蛋白1gG(市售)、碳酸钠(无水)、碳酸氢钠、叠氮化钠、磷酸氢二钠(无水)、磷酸二氢钾(无水)、氯化钠、氯化钾、Tween-20、鸡蛋清粉、聚乙烯吡咯烷酮、亚硫酸钠(无水)、牛血清白蛋白、二乙醇胺、氯化镁等。5现场检验鉴定5.1种子检查在11月～翌年2月份对市场销售的葫芦科作物种子和砧木种子进行扦样，每份样品取100粒，送指定的有关部门进行检测。重点检查用做砧木的种子。5.2田间调查3月～10月份在黄...
