—1——附件畜肉中卡拉胶的测定（BJS201804）1范围本方法规定了生、鲜肉中卡拉胶的液相色谱‐串联质谱测定方法。本方法适用于生鲜肉、冷却肉、冻肉中卡拉胶的定量测定。2原理样品经匀浆后，用盐酸溶液处理，其中的卡拉胶降解生成特征性寡糖，用液相色谱‐串联三重四极杆质谱检测寡糖含量，外标法定量。3试剂和材料本方法所用水为符合GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.2甲酸铵（HCOONH4）：色谱纯。3.1.3盐酸（HCl）：优级纯。3.2试剂配制10mM甲酸铵水溶液：称取甲酸铵（3.1.2）0.63g，用水溶解并定容至1000mL。3.3标准品卡拉胶：食品添加剂级。3.4标准储备液的配制称取卡拉胶0.1g（精确至0.1mg），用60℃温水溶解，转移至10mL容量瓶中，冷却至室温后，用水定容至刻度。此溶液浓度为10mg/mL，现用现配。4仪器和设备4.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI源）。4.2分析天平：感量为0.0001g。—2——4.3分析天平：感量为0.01g。4.4离心机：转速≥4000r/min。4.5涡旋混合器。4.6食品粉碎机。4.7匀浆机。4.8恒温水浴。5试样制备和保存依据GB/T9695.19‐2008规定的方法取样。样品剔除脂肪组织，瘦肉部分（＞100g）用食品粉碎机（4.6）粉碎混匀。混匀好的样品分成两份，分别作为试样（＞50g）和留样（＞50g），装入洁净容器中，密封并标记，于‐18℃保存。6试样处理6.1基质加标工作液称取4份打碎混匀的空白基质（确定不含卡拉胶的畜肉）各10g（精确至0.01g）于50mL离心管中，分别加入标准储备液（3.4）0.1mL，0.2mL，0.3mL，0.4mL，加入水使液体的总体积为23mL，10000rpm匀浆1min，加入2mL盐酸（3.1.3），加盖后涡旋30s，置于80℃水浴中20min，每10min取出振摇一次。取出冷却后，4000rpm离心5min，取上清液1mL，用乙腈1:1稀释后，过滤膜（0.22m,有机相），待测。6.2样品待测液称取10g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入23mL水，10000rpm匀浆1min，加入2mL盐酸（3.1.3），加盖后涡旋30s，置于80℃水浴中20min，每10min取出振摇一次。取出冷却后，4000rpm离心5min，取上清液1mL，用乙腈1:1稀释后，过滤膜（0.22m,有机相），待测。7测定7.1参考液相色谱条件7.1.1色谱柱：BEHAmide柱（粒径1.8μm，2.1mm×50mm），或性能相当者；7.1.2进样量：5µL；7.1.3柱温：30℃；7.1.4流速：0.3mL/min；—3——7.1.5流动相：A相：10mM甲酸铵水溶液（3.2）；B相：乙腈（3.1.1）。梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序...
