ICS65.150B51DB21辽宁省地方标准DB21/T3120—2019水产动物物种分子鉴定COI、16SrRNA分子标记法TechnicalspecificationforspeciesmolecularidentificationusingCOIand16SrRNAofaquaticanimals2019-02-28发布2019-03-28实施辽宁省市场监督管理局发布DB21/T3120—2019I前言本标准依据GB/T1.1—2009给出的规则制定。本标准由大连市质量技术监督局提出。本标准由辽宁省农业农村厅归口。本标准主要起草单位：辽宁省海洋水产科学研究院。本标准主要起草人：高磊、赫崇波、鲍相渤、高祥刚。附录A、B、C为资料性附录。DB21/T3120—20191水产动物物种分子鉴定COI、16SrRNA分子标记法1范围本方法规定了水产动物物种分子鉴定COI、16SrRNA分子标记法的相关术语和定义，标记方式，试剂、仪器和设备，样品采集、保存和前处理，DNA提取和检测，序列扩增和测序，以及物种鉴定的方法。本方法适用于水产动物物种分子鉴定COI、16SrRNA分子标记法。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1水产动物物种分子鉴定aquaticspeciesmolecularidentification指利用分子生物学手段,对水产动物样本（尤其适用于形态学特征相近、模糊或丢失的样本）的分子标记进行分析，鉴定生物种类的过程。3.2聚合酶链式反应polymerasechainreaction（PCR）用一对寡核苷酸引物、四种脱氧核糖核苷酸（dNTPs）为原料，在合适的温度、离子条件和耐热DNA聚合酶催化下，在体外人工合成特异DNA片段的过程。3.3DNA序列测定DNAsequencing测定DNA分子的核苷酸序列。3.4序列比对alignment为确定两个或多个序列之间的相似性和同源性，将他们按照一定的规律进行排列。3.5DB21/T3120—20192DNA条形码-COI细胞色素c氧化酶亚基I（cytochromeccoxidasesubunitI）。3.616SrRNA16S核糖体核糖核酸（16SribosomalRNA）。4标记方式水产动物的COI和16SrRNA的DNA序列进化速度较快，同时又相对保守，可作为分子标记条形码用于物种鉴定。通过PCR技术扩增水产动物的COI和16SrRNA基因部分序列，测序后在已知数据库中进行序列比对，确定物种分类信息。本方法同时对COI和16SrRNA两种分子标记条形码进行分析，并在GenBank（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank）和BOLDSystem（http://www.boldsyst...
