ICSX1667.100、竺T冫piDB13北省地方标准DB13/T1115-2009食品中军团菌的测定DeterminationofLegionellabacteriainfood2009-05-27发布2009-06-11实施河d匕省质量技术监督局发布食品伙伴网http://www.foodmate.net/DB13/T1115-2009月ij吕本标准参照工SO11731-1998《军团菌的检测方法（英文版）》制定。本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：河北省食品安全重点实验室、河北省食品质量监督检验研究院。本标准主要起草人：周正、张岩、周巍、刘辰魁、康素芬、刘东、穆燕魁。食品伙伴网http://www.foodmate.net/DB13/T1115-2009食品中军团菌的检测方法范围本标准规定了食品中军团菌的检验方法。该方法适用于饮用水中军团菌的检验。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1军团菌Legionella杆形菌，宽度0.3-0.9林m，长度为2-20¦Ìm以上，不形成内孢子或小囊，无英膜，不产酸，革兰氏染色阴性，借一两根或以上直的或弯曲的极鞭毛和侧鞭毛可以运动，偶尔可见无动力菌株。需氧，生长时需L一半胱氨酸和铁盐。氧化酶阴性或弱阳性，硝酸盐还原试验阴性，尿素酶阴性，液化明胶。细胞壁中有支链脂肪酸。可从有机化合物中摄取营养，可利用氨基酸作为能量来源。不发酵碳水化合物，亦不能使之氧化。可从地表水、泥土和热水及污染的湖水和河水中分离到本菌，但从土壤和动物中分离尚不了解，对人有致病性，DNA的G+Cmol％含量为39-43%(TmBd)¡ã3试剂3.1缓冲木炭酵母膏琼脂培养基（BCYE)3.2无L一半胱氨酸缓冲木炭酵母膏培养基（BCYE-Cys)3.3选择性缓冲木炭酵母膏培养基（GVPC)¡ã4仪器4.1恒温培养箱：36℃士1¡ãCo4.2天平：感量0.1g04.3无菌吸头。4.4无菌试管。4.5无菌锥形瓶。5操作步骤5.1总则：如果液体样品军团菌的数量估计超过105，可以采用直接平板法。为了确保低于这个数量样品中军团菌的检测，需采用浓缩技术。为了浓缩水样，可采用膜过滤法（(5.2)或离心法（(5.3)¡ã5.2膜过滤法：如果样品是浑浊的、乳浊的或有颜色的，应采用离心法。采用膜过滤装置进行膜过滤，采用直径47^-147mm，孔径0.22¦Ìm和0.45¦Ìm的膜。过滤后的膜应放置在带盖的无菌容器中，可用无菌剪刀剪碎，加5mL-25mL的无菌稀释液或无菌去离子水，不断摇动至少2min。也可将容器放入超声波中2^-10min.食品伙伴网http://www.foodmate.net/DB13/T1115-20095.3离心法：取200mL样品于300mL-500mL容积的离心瓶中，6000g离心10min或3000g离心30min，保持温度在巧℃一25¡ã...
