ICS65.020.20B04DB12天津市地方标准DB12/T841—2018转基因植物及其产品成分定量检测技术规范微流滴数字PCR法Technicalguidelinesforquantitativedetectionofgeneticallymodifiedplantsandderivedproducts—DropletdigitalPCRmethod2018-11-07发布2018-12-01实施天津市市场和质量监督管理委员会发布DB12/T841—2018I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由天津市农村工作委员会提出并归口。本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天津市东丽区产品质量监督检验所。本标准主要起草人：兰青阔、兰璞、李亮、赵新、沈晓玲、王成、宛煜嵩、陈锐、黄凤军、李文、李益歌。DB12/T841—20181转基因植物及其产品成分定量检测技术规范微流滴数字PCR法1范围本标准规定了转基因植物及其产品微流滴数字PCR检测方法的建立与确认的总体要求。本标准适用于转基因植物及其产品成分检测的微流滴数字PCR检测方法的建立与确认。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1微流滴数字PCRdropletdigitalPCR将DNA模板、引物/荧光探针、耐热DNA聚合酶及其缓冲液等PCR反应体系充分混匀后，通过乳化的方式分配至体积相同且相互物理隔离的油包水微流滴中。将形成的微流滴进行PCR扩增，对扩增后的微流滴进行荧光信号采集，通过阳性率和泊松分布计算获得样品中靶序列拷贝数或拷贝数浓度。2.2靶序列targetsequence在PCR检测方法中，用作检测靶标的特异性DNA序列。2.3特异性specificity实时荧光定量PCR的引物和探针对样品中靶标片段精准识别的能力。2.4定量限limitofquantification(LOQ)在可接受的正确度和精密度水平上，样品中被定量检出的最低DNA模板含量或浓度。2.5正确度trueness多次测试的均值与采纳的标准值之间的接近程度。2.6方法确认validationofmethod通过提供明确的实验证据，证明所使用的检测方法能够充分满足测试目标的需求。3实验室资质进行转基因植物数字PCR检测方法制定的实验室，应满足以下要求：——具备资质的转基因生物安全机构，从事过转基因植物成分定量测量工作，参加过权威部门组织的转基因植物定量测量能力验证或计量比对，并且测量结果在可控范围内；——具备承担转基因生物安全检测工作所需的仪器设备和环境设施；——转基因植物数字PCR检测方法研制人员应具备转基因生物安全检测工作相关业务知识。DB12/T841—201824技术要求4.1方法的建立4.1.1检测引物和探针的设计与筛选依据靶序列设计...
